Entwicklung eines Zellkultursystems für murine rheumatoide Fibroblasten unter mechanischem Stress und Untersuchung ihrer Reaktion auf Dehnung und Behandlung mit TNF-a-Antikörper [TNF-alpha-Antikörper] durch Genexpressionsanalyse:
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2009
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
PATHOGENESE
DER
RA
3
1.2
DIE
BEDEUTUNG
DER
FIBROBLASTEN
5
1.3
DIE
LS
48
ZELLLINIE
6
1.4
EXPERIMENTELLE
MODELLE
DER
RHEUMATOIDEN
ARTHRITIS
8
1.4.1
TIERMODELLE
8
1.4.2
IN-VITRO-MODELLE
10
1.5
DIE
ROLLE
VON
ZYTOKINEN
IN
DER
RA
12
1.5.1
TNF-A
13
1.6
THERAPIE
DER
RA
16
1.6.1
DISEASE
MODIFYING
ANTI-RHEUMATIC
DRUGS
(DMARDS)
16
1.6.2
CORTISON
18
1.7
TNF-A-ANTIKOERPER
19
1.7.1
ADALIMUMAB
20
1.7.2
ETANERCEPT
22
1.7.3
INFLIXIMAB
23
1.8
ZIELSETZUNG
24
2
MATERIAL
UND
METHODEN
25
2.1
ZELLKULTUR
25
2.1.1
REAGENZIEN
25
2.1.2
DURCHFUEHRUNG
26
2.1.2.1
AUFTAUEN
DER
ZELLEN
26
2.1.2.2
BESTIMMEN
DER
ZELLZAHL
MITTELS
NEUBAUER-KAMMER
26
2.2
KULTIVIERUNG
27
2.2.1
PASSAGIEREN
VON
ADHAERENTEN
ZELLEN
27
2.3
DEHNUNGSEXPERIMENT
28
2.3.1
REAGENZIEN
28
2.3.2
KULTIVIERUNG
DER
FLEXCELL-PLATTEN
28
2.3.3
DURCHFUEHRUNG
DES
DEHNUNGSEXPERIMENTES
29
2.4
RNA-PRAEPARATION
30
2.4.1
REAGENZIEN
31
2.4.2
DURCHFUEHRUNG
31
2.5
BESTIMMUNG
DER
GENEXPRESSION
(HYBRIDISIERUNGSPROTOKOLL)
32
2.5.1
REAGENZIEN
32
2.5.2
DURCHFUEHRUNG
35
2.6
DATENANALYSE
36
2.6.1
SOFTWARE
36
2.6.2
DURCHFUEHRUNG
36
2.7
REVERSE
TRANSKRIPTION
DER
RNA
IN
CDNA
37
2.7.1
REAGENZIEN
37
2.7.2
DURCHFUEHRUNG
37
2.8
SEMIQUANTITATIVE
PCR
MIT
DEM
LIGHTCYCLER
38
2.9
GELELEKTROPHORESE
38
2.9.1
REAGENZIEN
38
2.9.2
DURCHFUEHRUNG
38
3.
ERGEBNISSE
40
3.1
ZELLKULTUR
40
3.1.1
REAGENZIEN
40
3.1.2
BESTOMMUNG
DER
ZELLZAHL
IN
DEN
FLEXCELL-WELLS
40
3.2
DEHNUNGSEXPERIMENT
43
3.2.1
LICHTMIKROSKOPISCHE
KONTROLLE
43
3.2.2
RNA
GEWINNUNG
43
3.2.3
RNA
ANALYSE
43
3.2.4
UEBERPRUEFUNG
DER
GUELTIGKEIT
DER
ARRAY-DATEN
DURCH
REAL-TIME
PCR
45
3.2.5
UEBERPRUEFUNG
DER
SPEZIFITAET
DER
PCR
DURCH
GELELEKTROPHORESE
47
4.
DISKUSSION
49
4.1
ZELLKULTUR
50
4.2
DEHNUNGSEXPERIMENT
51
5.
ZUSAMMENFASSUNG
6.
ANHANG
7.
LITERATURVERZEICHNIS
59
62
66
8.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
9.
ERKLAERUNG
UEBER
DIE
EIGENSTAENDIGE
ABFASSUNG
DER
ARBEIT
10
VEROEFFENTLICHUNG
11
LEBENSLAUF
91
92
93
94
12
DANKSAGUNG
95 |
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