Funktionelle Interaktion von neuen Mitgliedern der dok-Familie mit der Rezeptor-Tyrosinkinase c-Ret:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG 6
2 EINLEITUNG 7
2.1 C-RET IST EIN MITGLIED DER REZEPTOR-TYROSINKINASE-FAMILIE 7
2.2 REKRUTIERUNG VON SIGNALPROTEINEN DURCH REZEPTOR-TYROSINKINASEN 9
2.3 VERSCHIEDENE KLASSEN VON SIGNALPROTEINEN 10
2.4 AKTIVIERUNG VON SIGNALPROTEINEN DURCH REZEPTOR-TYROSI
NKINASEN 11
2.5 REGULATION DER AKTIVITAET VON REZEPTOR-TYROS
INKINASEN 12
2.6 SPEZIFITAET DER REZEPTOR-TYROSINKINASE-SIGNALTRANSDUKTION 13
2.7 SIGNALSPEZIFITAET DURCH DOCKING-PROTEINE 14
2.8 FUNKTION DER C-RET SIGNALTRANSDUKTION IN DER EMBRYOGENESE 15
2.9 C-RET AKTIVIERT VERSCHIEDENE SIGNALWEGE 16
2.10 C-RET MUTATIONEN SIND MIT VERSCHIEDENEN KRANKHEITEN ASSOZIIERT 17
3 MATERIAL UND METHODEN 19
3.1 STANDARDMETHODEN 19
3.2 KLONIERUNG DER HEFE-EXPRESSIONSKONSTRUKTE UND DER EGFR/RET-DOK-
HYBRIDREZEPTOREN 21
3.3 HEFE-2-HYBRID-SCREEN 22
3.4 IN SITU-HYBRIDISIERUNG ' 23
3.5 KULTUR, TRANSFEKTION UND SELEKTION VON ZELLEN 25
3.6 IMMUNPRAEZIPITATION UND IMMUNOBLOT 26
3.7 FAR-WESTEM-BLOT-ANALYSE 27
3.8 MAP-KINASE UND ELK-REPORTER-ASSAYS 27
3.9 HERSTELLUNG UND AUFREINIGUNG EINES ANTI-DOK-5 ANTISERUMS 28
3
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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4 ERGEBNISSE
31
4.1 IDENTIFIZIERUNG NEUER SUBSTRATE VON C-RET IM HEFE-2-HYBRID-SYSTEM 31
4.2 KLONIERUNG DER ALS NEUE RET-SUBSTRATE IDENTIFIZIERTEN MITGLIEDER DER
DOK-FAMILIE 35
4.3 STRUKTURELLE VERWANDTSCHAFT DER DOK-PROTEINE MIT MULTIADAPTER-
SIGNALPROTEINEN 38 .
4.4 SPEZIFISCHE INTERAKTION DER DOK-PROTEINE MIT PHOSPHOTYROSIN 1062
IN C-RET 40
4.5 GEWEBESPEZIFISCHE EXPRESSION DER MITGLIEDER DER DOK-FAMILIE IM MAUS-
EMBRYO 42
4.6 EXPRESSION DER DOK-FAMILIE WAEHREND VERSCHIEDENER EMBRYONALSTADIEN
UND IM ADULTUS 45
4.7 INTERAKTION DER DOK-PROTEINE MIT C-RET IN SAEUGERZELLEN UND IN VIVO
47
4.8 DIE DOK-PTB-DOMAENE VERMITTELT DIREKTE BINDUNG AN C-RET 49
4.9 DOK-4 UND DOK-5 VERMITTELN C-RET-INDUZIERTE NEURONALE
DIFFERENZIERUNG 51
4.10 UNTERSCHIEDLICHE EFFEKTE VON DOK-4/-5 UND DOK-2 AUF DIE AKTIVIERUNG
DES MAP-KINASE-SIGNALWEGS 54
5 DISKUSSION 58
5.1 SPEZIFISCHE EXPRESSION UND REZEPTOR-INTERAKTION DER MITGLIEDER DER
DOK-FAMILIE 58
5.2 BETEILIGUNG SPEZIFISCHER MULTIADAPTER-SIGNALPROTEIPE AN DER
SIGNALTRANSDUKTION VON C-RET 60
5.3 UNTERSCHIEDLICHE FUNKTIONEN VERSCHIEDENER DOK-PROTEINE BEI DER
SIGNALTRANSDUKTION 62
5.4 DIE DOK-BINDUNGSSTELLE VON C-RET, TYROSINREST 1062, IST ESSENTIELL
FUER
C-RET-INDUZIERTE NEURONALE DIFFERENZIERUNG 63
5.5 SPEZIFITAET DER C-RET-SIGNALTRANSDUKTION DURCH GEWEBESPEZIFISCHE
EXPRESSION DER DOK-MULTIADAPTER 64
4
5.6 MOEGLICHE FUNKTION DER WEITEREN IM HEFE-SCREEN IDENTIFIZIERTEN NEUEN
BINDUNGSPARTNER VON C-RET 66
6 LITERATURVERZEICHNIS 68
7 ANHANG 82
ABKUERZUNGEN , 82
ERKLAERUNG 83
LEBENSLAUF 84
5 |
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