Gewinnung von Antikörpern aus Huhn und Kaninchen gegen die Dihydroorotat-Dehydrogenase des Menschen:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Marburg
Görich und Weiershäuser
1998
|
| Schriftenreihe: | Wissenschaft in Dissertationen
324 |
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: Marburg, Univ., Diss., 1998 |
| Beschreibung: | III, 114 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
III
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
SONDERSTELLUNG
DER
DIHYDROOROTAT-DEHYDROGENASE
(DHODEHASE)
IN
DER
DE
NOVO-PYRIMIDINSYNTHESE
.
1
1.2
DIHYDROOROTAT-DEHYDROGENASEN
VERSCHIEDENER
SPEZIES
.
4
1.3
DIE
DHODEHASE
ALS
ANGRIFFSPUNKT
NEUER
PHARMAKA
.
S
1.4
HUEHNEREIER
ALS
ANTIKOERPERQUELLE
.
8
1.5
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.
10
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
12
2.1
REAGENZIEN
UND
GERAETE
.
12
2.2
METHODEN
DER
MOLEKULARBIOLOGIE
UND
DER
PROTEINCHEMIE
.
14
2.2
1
EXPRESSION
DES
FUSIONSPROTEINS
.
14
2
2.2
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
.
15
2.2
3
FAERBEMETHODEN
FUER
DIE
GELELEKTROPHORESE
.
17
2.2
4
MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG
.
19
2.2.5
PROTEINBESTIMMUNG
MIT
BICINCHINONIGER
SAURE
.
19
2
2
6
METALLCHELATAFFMITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
20
2.2.7
REKONSTITUTION
DER
PROTEINE
DURCH
DIALYSE
.
22
2.2
8
ENTFERNUNG
DER
HISTIDINRESTE
(HIS-TAG)
.
22
2.2.9
ULTRAFILTRATION
.
24
2.3
IMMUNOLOGISCHE
TECHNIKEN
.
25
2.3
1
HAEUFIG
VERWENDETE
LOESUNGEN
.
25
2.3.2
TIERE
FUER
DIE
GEWINNUNG
VON
ANTIKOERPERN
.
25
2
3.3
IMMUNISIERUNG
DER
TIERE
.
25
2.3.4
BLUTENTNAHME
UND
GEWINNUNG
VON
KANINCHENSERUM
.
26
2.3.5
GEWINNUNG
VON
IGY
AUS
EIDOTTER
.
26
2
3.6
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
.
27
2.3
7
PROTEINTRANSFER
AUF
MEMBRANEN
.
28
2.3
8
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
AUF
MEMBRANEN
.
30
2
3.9
AFFINITAETSREINIGUNG
DER
IMMUNGLOBULINE
.
32
2.4
IMMUNHISTOCHEMISCHE
TECHNIKEN
.
34
2
4.1
HERSTELLUNG
VON
GEWEBESCHNITTEN
.
34
2.4.2
BEHANDLUNG
DER
SCHNITTE
VOR
UND
NACH
DEM
FAERBEN
.
34
2.4.3
DIE
HAEMATOXYLIN-EOSIN-FARBUNG
.
36
2.4
4
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBEMETHODEN
.
36
INHALTSVERZEICHNIS
3.
ERGEBNISSE
.
41
3.1
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
DES
REKOMBINANTEN
DHODEHASE
FRAGMENTS
(PROTEIN-18)
AUS
ESCHERICHIA
COLI
.
41
3.1.1
KONTROLLE
DER
EXPRESSION
.
41
3
1.2
REINIGUNG
DES
FUSIONSPROTEINS
MITTELS
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
.
.
42
3.13
ABSPALTUNG
DES
HIS-TAGS
.
45
3.1.4
ENTFERNUNG
DES
SPALTPRODUKTES
.
46
3.1.5
VERGLEICH
DER
ANFARBBARKEIT
VON
PROTEIN-18
MIT
COOMASSIE-BLUE
UND
SILBEMITRAT
.
48
3.2
ANTIKOERPER
GEGEN
PROTEIN-18
.
50
3.2.1
AUSWAHL
DER
TIERE
.
50
3
2.2
IMMUNISIERUNG
UND
ISOLIERUNG
VON
IMMUNGLOBULINEN
AUS
EIERN
.
51
3
2.3
KONTROLLE
DER
IMMUNANTWORT
MIT
ELISA
.
52
3.2.4
ANTIKOERPERERTRAG
AUS
HUHN
UND
KANINCHEN
.
54
3.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTIKOERPER
GEGEN
PROTEIN-18
.
55
3.3.1
CHARAKTERISIERUNG
MIT
ELISA
.
56
3
3
2
CHARAKTERISIERUNG
MIT
DOT-BLOT
.
59
3
3
3
CHARAKTERISIERUNG
MIT
WESTEMBLOT
.
62
3.4
AFFINITAETSREINIGUNG
DER
ANTIKOERPER
.
67
3.4.1
KONTROLLE
DER
AFFINITAETSREINIGUNG
MIT
DOT-BLOT
.
67
3
4.2
KONTROLLE
DER
AFFINITAETSREINIGUNG
MIT
WESTEMBLOT
.
69
3.5
IMMUNOCHEMISCHER
NACHWEIS
DER
DHODEHASE
.
71
3.5.1
DARSTELLUNG
MIT
WESTEMBLOT
.
71
3.5.1
IMMUNHISTOCHEMISCHE
UNTERSUCHUNGEN
AN
PARAFFINSCHNITTEN
.
74
4.
DISKUSSION
.
85
4.1
REINIGUNG
DES
FUSIONSPROTEINS
.
85
4.2
GEWINNUNG DER
ANTIKOERPER
.
87
4.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
GEWONNENEN
ANTIKOERPER
.
89
4.4
AFFINITAETSREINIGUNG
DER
ANTIKOERPER
IM
BATCH-VERFAHREN
.
90
4.5
IMMUNOCHEMISCHER
NACHWEIS
DER
DHODEHASE
IM
WESTERNBLOT
.
91
4.6
IMMUNHISTOCHEMISCHER
NACHWEIS
DER
DHODEHASE
.
94
4.7
HUHNANTIKOERPER
VERSUS
KANINCHENANTIKOERPER
.
99
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
101
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
103 |
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