Epigenetische Regulation der alpha-Synuclein Expression: Bedeutung von Alter, Geschlecht und Zelltyp
Gespeichert in:
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German English |
Veröffentlicht: |
Bonn
2017
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Beschreibung: | Enthält einen abgedruckten Zeitschriftenartikel |
Beschreibung: | 77 Seiten Illustrationen 30 cm |
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adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS......................................................................................
8
2.
EINLEITUNG.............................................................................................................10
2.1 REGULATION DER
GENEXPRESSION............................................................................10
2.1.1
EPIGENETIK.............................................................................................................
10
2.1.2 FUNKTION VON
DNA-METHYLIERUNG.........................................................................
12
2.1.3 VERERBUNG VON
METHYLIERUNGSMUSTERN................................................................13
2.1.4 METHYLIERUNG UND
ALTER.........................................................................................
13
2.1.5 MIT DNA-METHYLIERUNG ASSOZIIERTE
ERKRANKUNGEN..............................................15
2.1.6 METHODEN DER ANALYSE VON
METHYLIERUNG...........................................................15
2.1.6.1 BISULFITBEHANDLUNG MIT DARAUF FOLGENDER SEQUENZIERUNG
...................................
16
2.1.6.1.1 KLASSISCHE SEQUENZIERUNG (*GOLDSTANDARD*)
......................................................
17
2.1.6.1.2
PYROSEQUENZIERUNG...............................................................................................
17
2.2
SYNUCLEIN...............................................................................................................18
2.2.1 GESCHICHTE DER
SYNUCLEINE..................................................................................18
2.2.2 AUFBAU UND FUNKTION VON
SNCA.........................................................................
19
2.2.3 TOXIZITAET VON
SNCA..............................................................................................
20
2.2.4 SNCA UND MORBUS PARKINSON
.............................................................................
21
2.2.5 SNCA UND ANDERE NEURODEGENERATIVE ERKRANKUNGEN
......................................
22
2.2.6 AUFBAU DES
SNCA-
GENS......................................................................................22
2.2.7
REGULATION.............................................................................................................23
2.3
VORARBEITEN...........................................................................................................
24
2.4
ZIELSETZUNG...........................................................................................................
25
3. MATERIAL UND METHODEN
.....................................................................................
27
3.1
MATERIAL.................................................................................................................
27
3.1.1
KITS.........................................................................................................................27
3.1.2
CHEMIKALIEN..........................................................................................................
27
3.1.2.1
PCR-MATERIALIEN....................................................................................................
27
3.1.2.2 H20
.........................................................................................................................
28
3.1.2.3 PUFFER UND
LOESUNGEN............................................................................................28
3.1.2.4
MEDIEN...................................................................................................................
29
3.1.2.5 MATERIALIEN FUER GELE UND
AGARPLATTEN....................................................................29
3.1.2.6
ANTIBIOTIKA...............................................................................................................
29
3.1.2.7 SONSTIGE
CHEMIKALIEN............................................................................................
29
3.1.3 KOMPETENTE
BAKTERIEN..........................................................................................29
3.1.4 SONSTIGE VERBRAUCHSMATERIALIEN
.........................................................................
29
3.1.5
GERAETE....................................................................................................................
30
3.1.6
PIPETTEN..................................................................................................................30
3.1.7
EDV-PROGRAMME...................................................................................................30
3.1.8
BIOMATERIAL.............................................................................................................30
3.2
METHODEN................................................................................................................
32
3.2.1
BISULFITBEHANDLUNG................................................................................................
32
3.2.2 KLASSISCHE BISULFIT
SEQUENZIERUNG......................................................................
32
3.2.2.1 BISULFIT
PCR...........................................................................................................
32
3.2.2.2 AUFTRENNUNG IM AGAROSEGEL UND GELEXTRAKTION
...................................................
33
3.2.2.3 KLONIERUNG DER DNA IN DEN VEKTOR PJET 1.2
.......................................................
33
3.2.2.4 TRANSFEKTION IN E.
COLI............................................................................................
34
3.2.2.5 HERSTELLUNG VON LB-AMPICILLIN-PLATTEN UND
MEDIUM............................................34
3.2.2.6 AUSPLATTIEREN DER E. COLI UND ANZUECHTEN VON KOLONIEN
........................................
34
3.2.2.7
KOLONIE-PCR...........................................................................................................
34
3.2.2.8
PLASMIDPRAEPARATION................................................................................................
36
3.2.2.9
SEQUENZIERUNG.......................................................................................................
36
3.2.3
PYROSEQUENZIERUNG...............................................................................................37
3.2.3.1
PCR.........................................................................................................................
37
3.2.3.2
SEQUENZIERUNG.......................................................................................................
38
3.2.4 STATISTISCHE
ANALYSE..............................................................................................39
4.
ERGEBNISSE............................................................................................................
41
4.1 ALTERSABHAENGIGKEIT DES METHYLIERUNGSSTATUS VON
SNCA -
ERGEBNISSE DER
KLASSISCHEN BISULFIT SEQUENZIERUNG
....................................................................
42
4.2 ALTERSABHAENGIGKEIT DES METHYLIERUNGSSTATUS VON
SNCA
- ERGEBNISSE DER
PYROSEQUENZIERUNG..............................................................................................
47
4.3 VERGLEICH DER ERGEBNISSE VON KLASSISCHER BISULFIT SEQUENZIERUNG UND
PYROSEQUENZIERUNG
..............................................................................................
50
4.4
GESCHLECHTERVERGLEICH.........................................................................................
52
4.5 VERGLEICH DER METHYLIERUNG VON DNA AUS NEUN POSITIVEN UND NEUN
NEGATIVEN
ZELLEN.....................................................................................................................54
5.
DISKUSSION...........................................................................................................
57
6.
ZUSAMMENFASSUNG............................................................................................
62
7.
ANHANG.................................................................................................................
64
8.
LITERATURVERZEICHNIS...........................................................................................
71
9.
DANKSAGUNG........................................................................................................
77
10.
LEBENSLAUF...........................................................................................................
78
|
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