Wirkung von Hyaluronsäure auf Human-Chondrozyten in vitro in Korrelation mit der Genexpression sowie des Schädigungsgrades des Knorpelgewebes:
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Autor: Gerlach, Christina
Jahr: 2000
Inhaltsverzeichnis
Seite
Abkürzungsverzeichnis 1
1. Einleitung 3
1.1 Ätiologie der Osteoarthrose 4
1.2 Aufbau des gesunden Knorpels und 5
Pathogenese der Osteoarthrose
1.2.1 Morphologie und Biochemie des gesunden Knorpels 5
1.2.2 Pathogenese der Osteoarthrose (OA) 8
1.3 Hyaluronat bei Osteoarthrose 12
1.4 Zielsetzung der Arbeit 14
2. Material und Methoden 15
2.1 Material 15
2.1.1 Patientengut 15
2.1.2 Chemikalien und Kits 16
2.1.3 Puffer und Lösungen 17
2.1.4 Enzyme 18
2.1.5 Zellkultur-Medien und Zusätze 19
2.1.6 Standards 19
2.1.7 Geräte 19
2.2 Methoden 20
2.2.1 Zellkultur 20
2.2.1.1 Präparation und Verdau des Knorpels 20
2.2.1.2 Alginatkultur 22
2.2.1.3 Kultivierungsschema 23
2.2.2 Papainverdau der Proben aus der Zellkultur 24
2 2.3 Konzentrationsbestimmung von Proteoglykanen 25
2.2.4 DNS-Konzentrationsbestimmung 26
2.2.5 Histologie 27
2.2.5.1 Bandsägeschnitt 27
2.2.5.2 Safranin-O-Färbung 27
2.2.5.3 Histologische Beurteilung des
Knorpelschädigungsgrades nach Mankin 28
2.2.6 Extraktion von Gesamt-RNS 30
2 2.7 Konzentrationsbestimmung der RNS 30
2.2.8 RT-PCR 31
2.2.9 Quantitative PCR 31
2.2.10 Gelelektrophorese 33
2.2.11 Statistische Auswertung 34
3. Ergebnisse 35
3.1 Charakterisierung der Knorpelproben 35
3.1.1 Histologie 35
3.1.2 Genexpression 37
3.2 Ergebnisse der Zellkulturversuche 41
3.2.1 Proteoglykangehalt in Bezug auf den DNS-Gehalt 41
3.2.1.1 Vergleich der PG-Gehalte/DNS
der lateralen und medialen Kompartimente 43
3.2.1.2 Ergebnisse nach der Inkubation mit IL-1IJ 43
3.2.1.3 Ergebnisse nach der Inkubation mit HA 43
3.2.1.4 Ergebnisse nach der Inkubation mit IL-1S/HA 45
3.2.1.5 Vergleich der Ergebnisse der
IL-1IJ- und der IL-1S/HA- Gruppe 45
3.2.2 Einfluß der Versuchsgruppen auf den DNS Gehalt 47
4. Diskussion 48
4.1 Ziel und eigene Ergebnisse der Studie 48
4.2 Diskussion der Methodik 49
4.3 Diskussion der Wirkung von HA auf Chondrozyten 52
4.4 Diskussion der IL-18 Wirkung auf Chondrozyten 54
4.5 Diskussion der Wirkung von HA/IL-1S auf Chondrozyten 55
4.6 Direkte und indirekte
antiinflammatorische Wirkung von HA 57
4.7 PG-Gehalt/DNS in der Alginat-Zellkultur in Korrelation
mit dem histologischen Schädigungsgrad nach Mankin 58
4.8 Diskussion der Genexpressionsanalyse 59
5. Zusammenfassung 61
6. Summary 63
7. Literatur 65
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