Evaluation von Methoden zur Quantifizierung CD34-positiver peripherer Stammzellen:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2005
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| Beschreibung: | Berlin, Humboldt-Univ., Charité, Univ.-Med., Diss., 2005 |
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung und Zielstellung 1
1.1. Hämatopoetische Stammzellen 1
1.1.1. Klinische Bedeutung 1
1.1.2. Hämatologisch immunologische Grundlagen 3
1.1.3. Nachweismethoden: Zellkulturassays vs. Immunologische Methoden 5
1.2. Durchflußzytometrie und CD34 Quantifizierung 6
1.3. Zielstellung 7
2. Material und Methodik 9
2.1. Verwendete Reagenzien, Chemikalien und Geräte 9
2.2.1. Reagenzien und Chemikalien 9
2.2.2. Geräte 9
2.2. Das Probenmaterial 10
2.3. Aufbereitung des Probenmaterials 10
2.3.1. Die Antikörper 11
2.3.2. Die Lysemethoden 12
2.3.3. Stern Kit 13
2.4. Das Durchflußzytometer Aufbau und Funktionsweise 14
2.4.1. Das Flüssigkeitssystem 14
2.4.2. Das optische System 15
2.4.3. Das elektronisch signalverarbeitende System 16
I
2.5. Auswertestrategien 18
2.5.1. Die einfache Quadrantenmethode 18
2.5.2. Die CD45+34+ Quadrantenmethode 20
2.5.3. Die ISHAGE Methode 20
2.5.4. Stem Kit Auswertung 20
2.6. Statistische Methoden 22
2.6.1. Box Plots (Box und Whiskerdiagramm nach Tukey) 22
2.6.2. Intraclasskorrelationsanalyse 23
2.6.3. Residualplotanalyse nach Bland und Altman 24
2.6.4. Variationskoeffizient 24
2.6.5. Der nichtparametrische Vorzeichentest 25
3. Ergebnisse 26
3.1. Methodenvergleich zur Quantifizierung CD34 positiver Stammzellen 26
3.1.1. Einfluß der Fluochrommarkierung: FITC versus PE 26
3.1.2. Vergleich von Auswertestrategien: Ishage versus Quadranten 31
3.1.3. Einfluß der Lysemethode: FACS BD versus Ortho Lyse 42
3.1.4. Kombination von Lysemethoden und Auswertestrategien im
Vergleich mit der Stem Kit Methode 48
3.2. Ergebnisse sowie intra und intermethodische Variation
innerhalb einer Proben und Meßreihe 53
4. Diskussion 57
4.1. Fehlerquellen und Variabilitätsmöglichkeiten bei der
CD34 Quantifizierung 58
II
4.2. Einfluß der Fluochrommarkierung: FITC versus PE 61
4.3. Vergleich von Auswertestrategien: Ishage versus Quadranten 62
4.4. Einfluß der Lysemethode: FACS BD versus Ortho Lyse 65
4.5. Kombination von Lysemethoden und Auswertestrategien im
Vergleich mit der Stem Kit Methode 67
4.6. Ergebnisse sowie intra und intermethodische Variation
innerhalb einer Proben und Meßreihe 69
4. Zusammenfassung 71
5. Literaturverzeichnis 74
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