Monozytäre Expression von Gewebsthromboplastin nach Adhäsion an Gefäßmuskelzellen:
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| Published: |
2001
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1
INHALTSVERZEICHNIS
1. KAPITEL: EINLEITUNG
5
1.1 ZIEL DER STUDIE 5
1.2 ATHEROSKLEROSE UND IHRE ROLLE BEIM AKUTEN KORONARSYNDROM 5
1.2.1 AUFBAU ATHEROSKLEROTISCHER PLAQUES 5
1.2.1.1 VERSCHIEDENE PLAQUE TYPEN 5
1.2.1.2 DIE ROLLE DER GLATTEN GEFAESSMUSKELZELLEN (SMC) 7
1.2.1.3 DIE ROLLE DER MONONUKLEAEREN ZELLEN (MNC) _ 8
1.2.2 THROMBOSE BEI AKUTEM KORONARSYNDROM 9
1.3 WICHTIGE OBERFLAECHENREZEPTOREN AUF GLATTEN MUSKELZELLEN UND IHRE
GEGENREZEPTOREN AUF MONOZYTEN 10
1.3.1 OBERFLAECHENREZEPTOREN AUF GLATTEN MUSKELZELLEN 10
1.3.2 OBERFLAECHENREZEPTOREN AUF MONOZYTEN: SS2-INTEGRINE 11
1.4 GEWEBSTHROMBOPLASTIN (TISSUE FACTOR TF) 12
1.4.1 DEFINITION UND STELLUNG IN DER GERINNUNGSKASKADE 12
1.4.2 FUNKTION UND INITIATION DES TISSUE FACTORS 13
1.5 INDUKTION DER TISSUE FACTOR EXPRESSION AUF MONOZYTEN 15
J
1.6 FRAGESTELLUNG 15
2
.
KAPITEL: MATERIAL UND METHODEN 17
2.1 ISOLATION MONONUKLEAERER ZELLEN UND MONOZYTEN AUS VOLLBLUT 17
2.1.1 GEWINNUNG MONONUKLEAERER ZELLEN (MNC) MITTELS FICOLL-HYPAQUE-
TECHNIK 17
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2
2.1.2 GEWINNUNG VON MONOZYTEN MITTELS SEQUENTIELLER FICOLL-HYPAQUE-
UND PERCOLL-GRADIENTEN-TECHNIK 18
2.2 ZELLKULTUR 19
2.2.1 ZELLINIE DER AORTALEN GEFAESSMUSKELZELLEN UND IHRE KULTIVIERUNG 19
2.2.2 ZELLINIE DER CHO-ZELLEN UND IHRE KULTIVIERUNG 19
2.3 INKUBATION VON MONONUKLEAEREN ZELLEN / MONOZYTEN UND AORTALEN
GEFAESSMUSKELZELLEN ODER CHO-ZELLEN 20
2.3.1 PRINZIP 20
2.3.2 TRYPANBLAU-AUSSCHLUSSTEST, PANOPTISCHE FAERBUNG NACH PAPPENHEIM 21
2.3.3 INKUBATION UNTER ZUSATZ VON ANTIKOERPERN 22
2.3.3.1 ANTIKOERPER GEGEN DIE OBERFLAECHENREZEPTOREN AUF AORTALEN
GEFASSMUSKELZELLEN ODER CHO-ZELLEN 22
2.3.3.2 ANTIKOERPER GEGEN DIE OBERFLAECHENREZEPTOREN AUF MNC ODER MONO
ZYTEN 22
2.3.4 INKUBATION UNTER ZUSATZ VON FIBRINOGEN 22
2.3.5 KONTROLLEXPERIMENTE 23
2.4 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE BESTIMMUNG DER ICAM-1 -EXPRESSION 23
2.4.1 PRINZIP 23
2.4.2 DURCHFUEHRUNG MIT AORTALEN GEFAESSMUSKELZELLEN UND CHO-ZELLEN 23
2.5 RNA-PRAEPARATION UND NORTHERN BLOT ANALYSE 24
2.6 TF ELISA , 25
2.6.1 PRAEPARATION DER ZELLEN 25
2.6.2 AUFBAU DES ELISA-TESTS 26
2.7 BESTIMMUNG DER PROKOAGULATORISCHEN AKTIVITAET 26
2.7.1 MESSPRINZIP DER PROKOAGULATORISCHEN AKTIVITAET 26
2.7.2 HERSTELLUNG DES PLASMAPOOLS 27
2.7.3 PRAEPARATION DER ZELLEN 27
3
2.7.4 MESSUNG DER PROKOAGULATORISCHEN AKTIVITAET (PKA) UND AUSWERTUNG 27
2.8 UNTERSUCHUNGEN ZUR ENDOTOXINKONTAMINATION 28
2.8.1 MINIMIERUNG DER KONTAMINATION 28
2.8.2 ENDOTOXINTEST 28
2.9 STATISTISCHE ANALYSE UND UEBERSICHT 29
3. KAPITEL: ERGEBNISSE 30
3.1 IC AM-1 EXPRESSION UND PROKOAGULATORISCHE AKTIVITAET VON GLATTEN
MUSKELZELLEN 30
3.2 INDUKTION DER PROKOAGULATORISCHEN AKTIVITAET BEI KOINKUBATION VON
MNC BZW. MONOZYTEN MIT AORTALEN GEFAESSMUSKELZELLEN 30
3.3 TF MRNA UND PROTEIN-EXPRESSION NACH MNC/VSMC-KOINKUBATION 34
3.4 INDUKTION DER PROKOAGULATORISCHEN AKTIVITAET IN MONOZYTEN DURCH
KOINKUBATION MIT ICAM-1 TRANSFEZIERTEN CHO-ZELLEN 36
*
4. KAPITEL: DISKUSSION 38
4.1 DISKUSSION DER METHODIK 38
4.1.1 IN-VITRO-MODELL 38
4.1.2 MOEGLICHE EINFLUESSE DER ZELLPRAEPARATION 39
4.1.3 DER EINFLUSS DER ENDOTOXINKONTAMINATION AUF DIE MONOZYTAERE PRO
KOAGULATORISCHE AKTIVITAET 40
4.1.4 DER ZUSAMMENHANG ZWISCHEN MONOZYTAERER PROKOAGULATORISCHER
AKTIVITAET UND TF 41
4.2 WEITERE AGONISTEN DER INDUKTION DER PROKOAGULATORISCHEN AKTIVITAET 41
4
4.3 DER EINFLUSS VON FIBRINOGEN 42
4.4 DIE TF-GENERIERUNG BEI GLATTEN MUSKELZELLEN IM VERGLEICH MIT DER
BEIM EINSATZ VON ENDOTHELZELLEN 43
4.5 DER BEITRAG DER ADHAESIONSMOLEKUELE ZUR TF-INDUKTJON 43
4.5.1 BLOCKADE DER ADHAESIONSMOLEKUELE AUF AORTALEN GEFAESSMUSKELZELLEN
UND IHRE AUSWIRKUNG AUF DIE PROKOAGULATORISCHE AKTIVITAET 43
4.5.2 BLOCKADE DER GEGENREZEPTOREN AUF MONOZYTEN UND IHRE AUSWIRKUNG
AUF DIE PROKOAGULATORISCHE AKTIVITAET 44
4.6 DIE BEDEUTUNG DER ERGEBNISSE IM RAHMEN DER PATHOPHYSIOLOGIE UND
AUSBLICK ~~ 45
5. KAPITEL: ZUSAMMENFASSUNG 47
6. KAPITEL: LITERATURVERZEICHNIS 48
7
.
KAPITEL: DANKSAGUFIG 55 |
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