Experimentelle Untersuchung zum Nachweis von Knochenzellwachstum in besiedelten Konstrukten im Mausmodell:
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Autor: Ern, Christina
Jahr: 2008
Inhaltsverzeichnis 5
Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 8
1.1. Grundlagen 8
1.1.1. Das Konzept von Tissue Engineering 9
1.1.1.1. Humane mesenchymale Stammzellen 11
1.1.1.2. Leitschienen 12
1.1.1.3. Wachstumsfaktoren ..14
1.1.2. Kultivierungsbedingungen 15
1.1.3. In vivo-Modell 18
1.1.4. Nachweismöglichkeiten implantierter Zellen 20
1.2. Aulgabenstellung 21
2. Material und Methoden 22
2.1. Zellkultur 22
2.1.1. Zelten 22
2.1.2. Kultivierungsbedingungen und Medien 22
2.1.3. Ausplattieren der Zellen auf die Glasobjektträger 23
2.2. Leitschienenbehandlung in vitro 23
2.2.1. Leitschienen 23
2.2.2. Besiedelung der Leitschienen 24
2.2.3. Kultivierung der Leitschienen 24
2.2.3.1. Statische Kultivierung 24
2.2.3.2. Dynamische Kultivierung 24
2.2.3.3. Kontrollgruppe 25
2.3. Leitschienenbehandlung in vivo 26
2.3.1. Implantation der Leitschienen 26
2.3.1.1. Anästhesie 26
2.3.1.2. Implantation der Konstrukte 28
2.3.1.3. Explantation der Konstrukte und Organentnahme 29
2.4. Histologische Auswertung der Konstrukte 32
2.4.1. MMA-Einbettung 32
2.4.2. Anfertigung der MMA-Schnitte 32
2.4.3. Histologische Färbung der Dünnschnitte 33
2.4.4. Auswertung der Proben 33
2.5. Immunhistochemische Untersuchungen der Leitschienen 35
2.5.1. Anfertigung von Kryoschnitten 35
2.5.2. Immunhistochemische Markierungen der Kryoschnitte 35
2.5.2.1. Immunhistochemische Markierung mit dem Antikörper gegen
humane Nuklei 35
2.5.2.2. Immunfluoreszenzmarkierung mit Anti-ß-2-Mikroglobulin 36
2.5.2.3. Immunhistochemische Markierung mitHLA-1 Antikörpern 37
2.5.3. Immunhistochemische Auswertung der Proben 38
2.6. Molekularbiologische Untersuchungen 39
2.7. Substanzen, Materialien und Geräte 39
3. Ergebnisse **
3.1. Effizienz der Leitschienenbesiedellung 44
3.2. Histologische Auswertung der Leitschienen **
3.2.1. Granulationsgewebe 44
3.2.2. Entzündungen 47
3.2.3. Nekrosen 48
3.2.4. Fettgewebe 49
3.2.5. Blutgefäße 50
3.2.6. Fremdkörperriesenzellen 51
3.3. Immunhistochemische Auswertung der Leitschienen 52
3.3.1. Mouse-to-mouse Detection System 52
3.3.2. Immunofluoreszenz Markierung mit Anti-ß-2-Mikroglobulin Antikörpern.53
3.3.3. Immunhistologische Markierung mit Anti-HLA-1 Antikörper 55
4. Diskussion 58
4.1. Diskussion der Methodik 58
4.1.1. Zellen 58
4.1.2. Leitschienen 59
4.1.3. Beimpfungsmethode 61
4.1.4. Kultivierung 62
4.1.5. Immunohistologtsche Färbemethoden 63
4.1.5.1. Mouse-to-mouse Detection System 63
4.1.5.2. Anti-B2-Mikroglobulin 63
4.1.5.3. Antj-HLA-Antikörper 65
Inhaltsverzeichnis 7
4.2. Diskussion der Ergebnisse 65
5. Zusammenfassung 71
6. Literaturverzeichnis 72
Abkürzungsverzeichnis 88
Danksagung 89
Lebenslauf 90
Publikationen 92
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