Strukturelle und funktionelle Untersuchungen zu den Assembly-Domänen der Gag-Proteine von HIV-1:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG
AAAAAAAAAAAAAAAAAAEAAAAAAAAAAAOAAAAAAAAAAOAAAAAAAAAAAAAAOAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAOAA#AAAAAAAAAAAA
1
EINLEITUNG
A.1
PARTIKELAUFBAU
.
4
A.2
HIV-1
GAG-PROTEINE
.
5
A.2.1
BIOSYNTHESE
.
5
A.2.2
BEDEUTUNG
IM
VIRALEN
REPLIKATIONSZYKLUS
.
6
A.2.3
FUNKTIONELLE
REGIONEN
.
10
A.2.4
STRUKTUREN
.
14
A.3
ZIELSETZUNG:
STRUKTURELLE
UND
FUNKTIONELLE
UNTERSUCHUNGEN
ZU
DEN
ASSEMBLY
DOMAENEN
DER
GAG-PROTEINE
VON
HIV-1
.
17
B
MATERIAL
UND
METHODEN.AEAAAAAAAAAAAAA*A*OA
EAAAAAAAAAAOAAEAAAOAAAAAAAAAAAAA
AAAAAAAMAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
21
B.L
OLIGONUCLEOTIDE
UND
PLASMIDE
.
21
B.
1.1
OLIGONUCLEOTIDE
.
21
B.1.2
PLASMIDE
.
23
B.L.
2.1
HERSTELLUNG
DER
TWO-HYBRID
PLASMIDE
.
23
B.L.
2.2
EINFUEHRUNG
VON
MUTATIONEN
.
24
B.
1.2.3
HERSTELLUNG
DER
EXPRESSIONSPLASMIDE
.
26
B.2
TWO-HYBRID
SYSTEM
.
27
B.2.1
TRANSFORMATIONS-KOMPETENTE
HEFEZELLEN
UND
HEFE-TRANSFORMATION
.
27
B.2.2
NACHWEIS
DER
TRANSFORMIERTEN
TWO-HYBRID
PLASMIDE
UND
PROTEIN
EXPRESSION
DER
"BAIT"-FUSIONSPROTEINE
.
29
B.2.3
REPORTERGENAKTIVITAET
.
30
B.2.3.1
AEIS3-REPORTERGEN
(WACHSTUMSSELEKTION)
.
30
B.2.3.2
ZACZ-REPORTERGEN
(FARBSELEKTION)
.
31
B.3
PROTEINE
UND
PEPTIDE
.
33
B.3.1
PRODUKTION
UND
REINIGUNG
VON
PROTEINEN
.
33
IV
INHALTSVERZEICHNIS
B.3.1.1
PRODUKTION
.
33
B.3.
1.2
REINIGUNG
.
33
B.3.2
SEQUENZIERUNG
DES
AMINOTERMINUS
VON
PROTEINEN
.
35
B.3.3
ANALYTISCHE
GEIFILTRATION
.
35
B.3.4
SYNTHETISCHE
PEPTIDE
.
36
B.4
SPEKTROSKOPISCHE
METHODEN
.
36
B.4.1
UV/VIS-SPEKTROSKOPIE
.
36
B.4
.2
FLUORESZENZSPEKTROSKOPIE
.
37
B.4.3
CIRCULARDICHROISMUS
.
37
B.4.4
NMR-SPEKTROSKOPIE
.
38
B
4.4.1
'
H
I5
N
HSQC
SPEKTRUM
.
39
B
4.4.2
3D
NOESY-HSQC
SPEKTRUM
.
39
B.5
STABILITAET
VON
PROTEINEN
.
40
C
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION.
.
.
_
41
C.L
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
INTERAKTIONSVERHALTEN
DER
GAG-PROTEINE
IM
TWO-HYBRID
SYSTEM
.
44
C.1.1
TWO-HYBRID
KONSTRUKTE
.
45
C.
1.2
OPTIMIERUNG
DER
HEFE-TRANSFORMATIONSPROTOKOLLE
.
48
C.L.
3
ETABLIERUNG
DES
TWO-HYBRID
SYSTEMS
.
50
C.1.4
INTERAKTIONSSTUDIEN
.
52
C.
1.4.1
ERMITTLUNG
DER
INTERAKTIONSDOMAENEN
IM
GAG-VORLAEUFERPROTEIN
.
53
C.
1.4.2
MATRIXPROTEIN
.
57
C.L.
4.3
CAPSIDPROTEIN
.
60
C.L.4.4
DOPPELMUTANTEN
.
69
C.L.
5
TEILZUSAMMENFASSUNG
DER
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
INTERAKTIONS
VERHALTEN
DER
GAG
PROTEINE
IM
TWO-HYBRID
SYSTEM
.
70
C.2
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
STRUKTUR
UND
STABILITAET
DER
MATRIXPROTEINE
.
75
C.2.1
EXPRESSIONSPLASMIDE
.
76
C.2.2
PRODUKTION
UND
REINIGUNG
.
76
C.2.3
SEQUENZIERUNG
DER
GEREINIGTEN
MATRIXPROTEINE
.
83
INHALTSVERZEICHNIS
V
C.2.4
ANALYTISCHE
GELFILTRATION
.
83
C.2.5
SPEKTRALE
EIGENSCHAFTEN
DER
GEREINIGTEN
MATRIXPROTEINE
.
85
C.2.6
STABILITAET
DER
MATRIXPROTEINE
.
90
C.2.7
STRUKTURANALYSE
DER
MATRIXPROTEINE
PL7WR,
PL7/AUNDPL7/C
.
101
C.2.8
PEPTIDBINDUNGSSTUDIE
.
107
C.2.9
TEILZUSAMMENFASSUNG
DER
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
STRUKTUR
UND
STABILITAET
DER
MATRIXPROTEINE
.
111
ANHANG
.115
LITERATURVERZEICHNIS
.121 |
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