Einfluß fetaler Kälberseren als Medienzusatz auf Differenzierung und Proliferation von primären bovinen Osteoblasten:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2005
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| Beschreibung: | Marburg, Univ., Diss., 2005 |
| Beschreibung: | 93 Bl. Ill., graph. Darst. 30 cm |
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|---|---|
| adam_text | Inhalt 1
1 EINLEITUNG
1.1 Das Knochengewebe 4
1.1.1 Die verschiedenen Knochenzellen 5
1.1.1.1 Osteoblasten im Besonderen 6
1.1.2 Hormonelle Einflüsse auf den Knochenstoffwechsel 10
1.1.2.1 Parathormonwirkung im Besonderen 11
1.1.3 Einfluß mechanischer Belastung auf Knochenzellen 13
1.2 Zellkultivierung 15
1.2.1 Fetales Kälberserum als wichtiger Bestandteil des Kultur¬
mediums 16
1.2.2 Knochenzellkulturen 19
1.3 Aufgabenstellung 21
2 MATERIAL UND METHODEN
2.1 Materialien und Untersuchungsgut 23
2.1.1 Fetale Kälberseren 23
2.1.2 Nährmedien, Lösungen und Puffer, Chemikalien 24
2.1.3 Geräte und Verbrauchsmaterialien 25
2.1.4 Zellkultur 26
2.1.4.1 Zellisolierung und Zellkultivierung 26
2.1.4.2 Ablösen und Einfrieren (Kryokonservierung) der Zellen 28
2.1.4.3 Auftauen der Zellen, Zellzahlbestimmung und Aussäen der
Zellen 29
2.2 Methoden 31
2.2.1 DAPI-Mykoplasmen-Test 31
2.2.2 Immunzytochemischer Nachweis osteoblasten-spezifischer
Proteine 33
Inhalt 2
2.2.3 Intrazellulärer Kalziumnachweis nach Zugabe von Parathormon
(PTH) 36
2.2.3.1 Zellpräparation und Messung 36
2.2.3.2 Bildanalysesystem und Farbstoffe 38
2.2.4 MTT-Zellproliferationsassay 39
2.2.4.1 MTT-Test 39
2.2.4.2 Vier-Punkt-Dehnungsmaschine und Dehnungsvorgang 43
2.2.5 Aktivitätsbestimmung der knochenspezifischen alkalischen
Phosphatase 44
3 ERGEBNISSE
3.1 DAPI-Mykoplasmentest 46
3.2 Immunzytochemischer Antikörpertest 48
3.2.1 Nachweis von Osteoblasten-Proteinen 48
3.2.2 Zeitliche Bestimmung der Osteokalzinproduktion 53
3.3 Intrazellulärer Kalziumnachweis nach PTH-Zugabe 59
3.4 MTT-Zellproliferationsassay 61
3.4.1 MTT-Test 61
3.4.2 Bestimmung der Zellproliferationsrate 63
3.5 Aktivitätsbestimmung der knochenspezifischen alkalischen
Phosphatase 64
3.6 Gesamtauswertung 66
4 DISKUSSION 68
5 ZUSAMMENFASSUNG 78
Inhalt 3
6 LITERATURVERZEICHNIS 82
7 ANHANG 93
|
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Inhalt 1
1 EINLEITUNG
1.1 Das Knochengewebe 4
1.1.1 Die verschiedenen Knochenzellen 5
1.1.1.1 Osteoblasten im Besonderen 6
1.1.2 Hormonelle Einflüsse auf den Knochenstoffwechsel 10
1.1.2.1 Parathormonwirkung im Besonderen 11
1.1.3 Einfluß mechanischer Belastung auf Knochenzellen 13
1.2 Zellkultivierung 15
1.2.1 Fetales Kälberserum als wichtiger Bestandteil des Kultur¬
mediums 16
1.2.2 Knochenzellkulturen 19
1.3 Aufgabenstellung 21
2 MATERIAL UND METHODEN
2.1 Materialien und Untersuchungsgut 23
2.1.1 Fetale Kälberseren 23
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2.1.4 Zellkultur 26
2.1.4.1 Zellisolierung und Zellkultivierung 26
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2.1.4.3 Auftauen der Zellen, Zellzahlbestimmung und Aussäen der
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2.2.1 DAPI-Mykoplasmen-Test 31
2.2.2 Immunzytochemischer Nachweis osteoblasten-spezifischer
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Inhalt 2
2.2.3 Intrazellulärer Kalziumnachweis nach Zugabe von Parathormon
(PTH) 36
2.2.3.1 Zellpräparation und Messung 36
2.2.3.2 Bildanalysesystem und Farbstoffe 38
2.2.4 MTT-Zellproliferationsassay 39
2.2.4.1 MTT-Test 39
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2.2.5 Aktivitätsbestimmung der knochenspezifischen alkalischen
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3 ERGEBNISSE
3.1 DAPI-Mykoplasmentest 46
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3.2.1 Nachweis von Osteoblasten-Proteinen 48
3.2.2 Zeitliche Bestimmung der Osteokalzinproduktion 53
3.3 Intrazellulärer Kalziumnachweis nach PTH-Zugabe 59
3.4 MTT-Zellproliferationsassay 61
3.4.1 MTT-Test 61
3.4.2 Bestimmung der Zellproliferationsrate 63
3.5 Aktivitätsbestimmung der knochenspezifischen alkalischen
Phosphatase 64
3.6 Gesamtauswertung 66
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