Beiträge zur Isolation von Nukleinsäuren während verschiedener Entwicklungsstadien der Arzneipflanze Digitalis lanata:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1993
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| Beschreibung: | Halle-Wittenberg, Univ., Diss., 1994 |
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- ISA-
BEITRAEGE ZUR ISOLATION VON NUKLEINSAEUREN WAEHREND VERSCHIEDENER
ENTWICKLUNGSSTADIEN DER ARZNEIPFLANZE DIGITALIS LANATA
DISSERTATION
ZUR ERLANGUNG DES AKADEMISCHEN GRADES
DOCTOR RERUM NATURALIUM (DR. RER. NAT.)
VORGELEGT DER
MATHEMATISCH-NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET DER MART IN-LUTHER-UNI
VERSI.TAET HALLE-WITTENBERG
VON ULRIKE DUMKE-LEHMANN GEB. AM 1. MAI 1964 IN: BRANDENBURG
GUTACHTER:
1 . J{ . K * H
2. D C- F S.
3. FTC?^. H. L
HALLE (SAALE), AUGUST 1993
CF
O^OIA. A6- L, 1 (
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1. EINLEITUNG 1
2. MATERIALIEN UND METHODEN 5
2.1. PFLANZENMATERIAL 5
2.2. NAEHRMEDIEN 6
2.3. BAKTERIENSTAEMME UND PLASMIDE 8
2.4. ISOLATION VON DNA AUS DIGITALIS LANATA ZELLKULTUREN UND
TRANSFORMIERTEN GEWEBEN 9 2.4.1. ISOLATION VON DNA AUS ZELLKULTUREN
(VER- GLEICHS-DNA) , 9
2.4.2. ISOLATION VON DNA AUS TRANSFORMIERTEN GE- WEBEN UND PFLANZEN 10
2.4.2.1. GEWINNUNG VON DNA NACH DELLAPORTA 10
2.4.2.2. DNA-ISOLATION NACH JUNGHANS UND METZLAFF 11 2.4.3. REINIGUNG
VON DNA-PRAEPARATIONEN 12
2.4.3.1. CAESIUMCHLORID-DICHTEGRADIENTENZENTRIFUGA- TION . 12
2.4.3.2. REINIGUNG VON DNA UEBER QIAGEN-SAEULEN 12
2.4.4. EINSCHAETZUNG DER KONZENTRATION DER DNA- PRAEPARATIONEN 13
2.4.5. QUALITATIVE UNTERSUCHUNG DER DNA-PRAEPARA- TIONEN 14
2.4.5.1. DNA-RESTRIKTIONSENZYMANALYSE 14
2.4.5.2. AUFTRENNUNG UND PHOTOGRAPHISCHER NACHWEIS VON DNA IN
AGAROSEGELEN 14
2.4.5.3. MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG VON DNA-MOLE- KUELEN 15
2.4.5.4. SOUTHERN-TECHNIK 16
2.5. DNA-DNA-HYBRIDISIERUNG 18
2.5.1. ISOLATION DER NACHWEISSONDEN 18
2.5.1.1. ISOLATION VON PLASMID-DNA NACH BIRNBOIM UND DOLY * 18
2.5.1.2. EXTRAKTION VON PLASMID-DNA MIT HILFE VON QIAGEN-SAEULEN * 19
2.5.2. RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON DNA 20
2.5.?. FILTERHYBRIDISIERUNG 20
IMAGE 3
2.5.4. AUTORADIOGRAPHIE 21
2.6. ISOLATION VON RNA AUS DIGITALIS LANATA 22
2.6.1. ISOLATION VON GESAMT-RNA 22
2.6.1.1. ISOLATION VON GESAMT-RNA NACH REINBOTHE 22
2.6.1.2. EXTRAKTION VON GESAMT-RNA MIT GUANIDIN- THIOCYANAT - 23
2.6.1.3. ISOLATION VON GESAMT-RNA NACH DUNSMUIR 24
2.6.1.6. SPEKTROPHOTOMETRISCHE EINSCHAETZUNG DER EX- TRAKTIONSMETHODEN 26
2.6.2. ISOLATION VON MRNA 27
2.6.2.1. ISOLATION VON MRNA AUS GESAMT-RNA 27
2.6.2.2. EINSCHAETZUNG DER KONZENTRATION VON MRNA- PROBEN W 27
2.6.3. AUFTRENNUNG VON GESAMT- UND MRNA IN DENA-
TURIERENDEN AGAROSEGELEN 28
2.6.4. NORTHERN-TRANSFER VON GESAMT- UND MRNA AUF NYLONMEMBRANEN 2 9
2.6.5. HYBRIDISIERUNG VON RNA-PROBEN MIT RADIOAK- TIV MARKIERTEN
CDNA-KLONEN 29
2.6.6. RADIOAKTIVE MARKIERUNG DER CDNA 29
2.7. BESTIMMUNG DER RNA-ABBAUENDEN ENZYMAKTIVI- TAET 30
3. ERGEBNISSE 32
3.1. ZUR GEWINNUNG VON NUKLEINSAEUREN EINGESETZ-
TES PFLANZENMATERIAL 32
3.1.1. SOMATISCHE EMBRYONEN 32
3.1.2. SPROSSE UND KALLI 33
3.1.3. WURZELN 33
3.2. PRAEPARATION VON GESAMT- DNA AUS D. LANATA
GEWEBEN UND ZEILSUSPENSIONSKULTUREN 34
3.3. DNA-DNA-HYBRIDISIERUNG ZUM NACHWEIS DER QUALITAET DER
DNA-PRAEPARATIONEN 38
3.3.1. NACHWEIS DES OCTOPINSYNTHASEGENS 39
3.3.2. NACHWEIS VON MARKER- UND REPORTERGENEN 40
3.3.3. NACHWEIS DER TRANSFORMATION VON D. ISAATA MIT A. RHIZOGENES
WILDTYP STAEMMEN IN HAIRY -ROOT-KLONEN UND REGENERIERTEN PFLANZEN 43
IMAGE 4
3.4. ISOLATION VON GESAMT-RNA UND PRUEFUNG DER
PRAEPARATIONEN AUF QUALITAET UND QUANTI- TAET * 47
3.5. ISOLATION VON MRNA 54
3.6. NACHWEIS DER REINHEIT DER MRNA-POPULATIO- NEN DURCH
HYBRIDISIERUNGSEXPERIMENTE 56
4. DISKUSSION 57
4.1. PRAEPARATION VON GESAMT-DNA AUS VERSCHIE- DENEN ENTWICKLUNGSSTADIEN
VON D. LANATA 57 4.2. ISOLATION VON GESAMT- UND MRNA 74
5. ZUSAMMENFASSUNG 83
6. LITERATURVERZEICHNIS 89
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