Die LDH-Isoenzyme des Kalbsherzens: Darstellung, methodische und enzymkinetische Untersuchungen
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-
1
-
GLIEDERUNS
1
.EINLEITUNG
1.1.
VERSCHIEDENE
FORMEN
VON
LAKTATDEHYDROGENASEN(LDH)
1.1.1
.KRISTALLINE
DARSTELLUNG
1.1.2
.NACHWEIS
VERSCHIEDENER
LAKTATDEHYDROGENASEN
IN
ORGANEXTRAKTEN
UND
BLUTSEREN
MIT
HILFE
DER
ELEKTROPHORESE
1.1.3.
DEFINITION
DER
UNTERSCHIEDLICHEN
LDH-FORMEN
ALS
ISOENZYME
1.1.4.
ORGANSPEZIFITAET
DER
LDH
-
ISOENZYMMUSTER
UND
IHRE
BEDEUTUNG
FUER
DIE
KLINISCHE
DIAGNOSTIK
1.2
.CHEMISCHE
KONSTITUTION
DER
LDH
1.2.1
.AUFBAU
DER
LDH-ISOENZYME:KOMBINATION
VON
ZWEI
VERSCHIEDENEN
POLYPEPTIDEN
ZU
EINEM
TETRAMEREN
MOLEKUEL
1.2.2.
IMMUNOLOGISCHE
UNTERSCHIEDE
ZWISCHEN
DEN
FUENF
LDH
-
ISOENZYMEN
1.2.3
-ANNAHME
VON
ZWEI
GENEN
FUER
DIE
SYNTHESE
DER
VERSCHIEDENEN
POLYPEPTIDE
1.2.4.
AMINOSAEUREANALYSE
DER
LDH-ISOENZYME
1.3.
ENZYMATISCHE
EIGENSCHAFTEN
DER
LDH
-
ISOENZYME
1.3YY1
.AFFINITAET
ZU
PYRUVAT
UND
LAKTAT
1
.3.2.REAKTION
MIT
NAD-ANALOGEN
1.3.3
.EINFLUSS
DER
TEMPERATUR
UND
WASSERSTOFFIONEN
KONZENTRATION
AUF
DIE
ENZYMATISCHE
AKTIVITAET
1.3.4.
HEMMUNG
DURCH
SULFITIONEN
1
.4.LDH-ISOENZYMMUSTER
UND
ZELLSTOFFWECHSEL
1.4.1.
ISOENZYMVERTEILUNG
IN
DER
ONTOGENESE
1.4.2.
BEZIEHUNG
ZWISCHEN
DEM
LDH-ISOENZYMMUSTER
EI
NER
ZELLE
UND
IHREM
STOFFWECHSEL
2
1.5.FRAGESTELLUNG:
DIE
LDH-ISOENZYME
DES
KALBSHERZENS;
DARSTELLUNG,METHODISCHE
UND
ENZYMKINETISCHE
UNTER
SUCHUNGEN
1.5.1
.ISOENZYMVERTEILUNG
IM
REIZLEITUNGSSYSTEM
UND
ARBEITSMYOKARD
DES
KALBSHERZENS
1.5.2.
EINFLUSS
METHODISCHER
FAKTOREN
AUF
DAS
LDH
-
ISOENZYMMUSTER
1.5.3.
ENZYMKINETISCHE
UNTERSUCHUNGEN
2
.METHODIK
2.1
.UNTERSUCHUNGSMATERIAL
2.1.1
.PRAEPARATION
VON
KALBS
UND
RINDERHERZEN
2.1.2.
HERSTELLUNG
VON
EXTRAKTEN
FUER
DIE
ELEKTRO
PHORETISCHE
AUFTRENNUNG
2.2.
DURCHFUEHRUNG
DER
ELEKTROPHORESE
IN
POLYACRYLAMID
GEL
2.2.1
.HERSTELLUNG
DES
POLYACRYLAMID-GELS
2.2.2.
AUFTRAG
DER
PROBEN
AUF
DAS
POLYACRYLAMID-GEL
2.2.3.
DURCHFUEHRUNG
DER
ELEKTROPHORESE
2.3.
ANFAERBUNG
DER
LDH
-
ISOENZYMBANDEN
2.5.1
.ZUSAMMENSETZUNG
DER
FAERBELOESUNG
2.5.2
.INKUBATIONSBEDINGUNGEN
2.5.5.DENSITNMETRISCHE
AUSWERTUNG
2.5.4.
BESTIMMUNG
DER
RF-WERTE
2.5.5.
DARSTELLUNG
DER
LDH-ISOENZYME
BEI
VERSCHIE
DENEN
LAKTATKONZENTRATIONEN
2
.4.1ONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
2.4.1
.VORBEREITUNG
DER
DEAE-ZELLULOSE
UND
HERSTELLUNG
DER
SAEULENPACKUNG
2.4.2.
HERSTELLUNG
DER
EXTRAKTE
AUS
DEM
LINKEN
VEN
TRIKEL
DES
KALBSHERZENS
-
1
-
2.4.5.
DURCHFUEHRUNG
DER
CHROMATOGRAPHISCHEN
TRENNUNG
2.4.4.
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION,LEITFAEHIG
KEIT
UND
LDH-AKTIVITAET
IN
DEN
FRAKTIONEN
2.4.5.
IDENTIFIZIERUNG
DER
ISOLIERTEN
LDH
-ISOENZYME
2.5.
ENZYMKINETISCHE
UNTERSUCHUNGEN
DER
LDH-ISOENZYME
3.
ERGEBNISSE
3.1
.ELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
DER
EXTRAKTE
AUS
MYOKARD
UND
REIZLEITUNGSSYSTEM
3.1.1
.BESTIMMUNG
DER
LDH-GESAMTAKTIVITAET
IN
DEN
ORGANEXTRAKTEN
3.1
.2.LDH-ISOENZYMMUSTER
VON
ARBEITSMYOKARD
UND
REIZ
LEITUNGSSYSTEM
DES
KALBS
UND
RINDERHERZENS
3.1
.3.RF-WERTE
DER
LDH-ISOENZYME
1,2
UND
3
3.2.
ALTERUNGSVERSUCHE
3.2.1
.VERGLEICH
DER
LDH
-
ISOENZYMMUSTER
FRISCHER
UND
GELAGERTER
ORGANEXTRAKTE
3.2.2.
EINFLUSS
VON
SAUERSTOFF
UND
STICKSTOFF
AUF
DAS
ISOENZYMMUSTER
3.3-EINFLU3
DER
LAKTATKONZENTRATION
IN
DER
FAERBELOESUNG
AUF
DAS
ISOENZYMMUSTER
3.3.1
.ISOENZYMMUSTER
BEI
VERSCHIEDENEN
LAKTATKON
-
ZENTRATIONEN
3.3.2
.RF-WERTE
DER
LDH
-
ISOENZYME
1,2,3,4
UND
5
3.4.
CHROMATOGRAPHISCHE
DARSTELLUNG
DER
LDH-ISOENZYME
3.4.1
.RELATIVE
ANTEILE
DER
EINZELNEN
LDH
-
ISOENZYME
AN
DER
LDH-GESAMTAKTIVITAET
3.4.2.
IDENTIFIZIERUNG
DER
CHROMATOGRAPHISCH
ISOLIER
TEN
LDH-ISOENZYME
3.5.
ENZYMKINETISCHE
UNTERSUCHUNGEN
DER
LDH-ISOENZYME
1,2
UND
3
-
4
-
5.5.1
.MICHAELIS-MENTEN-KONSTANTEN
DER
LDH-ISOENZYME
FUER
LAKTAT
UND
PYRUVAT;SUBSTRATOPTIMA
5.5.2.
VERHALTEN
DER
ISOENZYME
BEI
SUBSTRATUEBERSCHUSS
4.
BESPRECHUNG
DER
ERGEBNISSE
4.1.
DAS
LDH-ISOENZYMMUSTER
DES
HERZMUSKELS
NACH
ELEK
TROPHORETISCHER
UND
CHROMATOGRAPHISCHER
TRENNUNG
DES
HERZMUSKELEXTRAKTES
4.1.1
.VERGLEICH
DER
ERGEBNISSE
BEIDER
METHODEN
4.1.2
.UNTERSCHIEDE
IN
DEN
TRENNUNGSVORGAENGEN
4.1
^.UNTERSCHIEDLICHE
NACHWEISMETHODEN
AUFGRUND
DER
VERSCHIEDENEN
ANZAHL
GLEICHZEITIG
NACHGEWIESENER
ISOENZYME
4.1.4.
SPEZIELLE
CHEMISCHE
UNTERSCHIEDE
DER
NACHWEIS
-
METHODEN
4.1.5.
BEDEUTUNG
DER
UNTERSCHIEDLICHEN
REAKTIONSKINETIK
DER
LDH-ISOENZYME
BEI
DEM
UMSATZ
VON
LAKTAT
UND
PYRUVAT
4.1.6.
UEBERLEGUNGEN
ZUR
ENZYMKINETIK
DER
LDH-ISOENZYME
BEI
DEM
NACHWEIS
MIT
LAKTAT
ALS
SUBSTRAT
4.1.7.
EINFLUSS
METHODISCHER
FAKTOREN
AUF
DAS
LDH-ISO
ENZYMMUSTER
4.2.
VERSUCH
EINER
DIFFERENZIERUNG
DER
BEZIEHUNG
ZWISCHEN
DEM
LDH-ISOENZYMMUSTER
EINER
ZELLE
UND
IHREM
STOFF
WECHSEL
AN
DEM
BEISPIEL
VON
REIZLEITUNGSSYSTEM
UND
ARBEITSMYOKARD
DES
KALBSHERZENS
4.2.1
.NACHWEIS
SOG."OXIDATIVER"
ISOENZYMMUSTER
IN
BEI
DEN
ORGANANTEILEN
4.2.2.
DER
STOFFWECHSEL
DES
REIZLEITUNGSSYSTEMS
NACH
HISTOCHEMISCHEN
UND
ENZYMATISCHEN
UNTERSUCHUNGEN
4.2.3
.STOFFWECHSEL
UND
LDH-ISOENZYMMUSTER
DER
PURKINJE
ZELLEN
-
5
-
4.3.
VERSUCH
EINER
ERKLAERUNG
FUER
DIE
SCHEINBARE
DIS
KREPANZ
ZWISCHEN
STOFFWECHSELTYP
UND
ISOENZYMMUSTER
AM
MODELL
DER
ALTERUNGSVERSUCHE
4.3.1
.LDH-ISOENZYMMUSTER
DER
GELAGERTEN
EXTRAKTE
4.3.2.
DEUTUNG
DER
ERGEBNISSE
DER
ALTERUNGSVERSUCHE
4.3.3
.LDH-ISOENZYMMUSTER
KERNLOSER
ZELLEN
4.4.
BEDEUTUNG
DER
ENZYMKINETISCHEN
EIGENSCHAFTEN
DER
LDH-ISOENZYME
FUER
DEN
STOFFWECHSEL
DER
ZELLE
4.4.1
.ERGEBNISSE
DER
ENZYMKINETISCHEN
UNTERSUCHUNGEN
4.4.2.
BEDEUTUNG
DER
UNTERSCHIEDLICHEN
ENZYMKINETISCHEN
EIGENSCHAFTEN
DER
LDH-ISOENZYME
FUER
DEN
GLYKO
LYTISCHEN
UND
AEROBEN
STOFFWECHSEL
4.4.3.
DAS
LDH-ISOENZYMMUSTER
EINER
ZELLE
UND
MOEG
LICHE
BEZIEHUNGEN
ZUM
ZELLSTOFFWECHSEL
5.
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