Untersuchungen zum Vorkommen von Isoformen des Zelladhäsionsmoleküles biliäres Glykoprotein (BGP) in Kolonkarzinomen und korrespondierender normaler Kolonschleimhaut:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1996
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| Beschreibung: | Hamburg, Univ., Diss., 1997 |
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ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
1
TEIL
A:
EINLEITUNG
.
2
1.
DAS
KOLOREKTALE
KARZINOM
.
2
2.
ZELLADHAESIONSMOLEKUELE
UND
KOLOREKTALE
KARZINOME
.
4
3.
DIE
HUMANE
CEA-GENFAMILIE
.
5
3.1.
DAS
CARCINOEMBRYONALE
ANTIGEN
(CEA)
.
7
3.2.
DAS
NONSPECIFIC-CROSSREACTING
ANTIGEN
(NCA
50/90)
.
8
3.3.
DAS
BILIAERE
GLYKOPROTEIN
(BGP)
.
8
3.4.
WEITERE
CEA-GENFAMILIENMITGLIEDER
.
11
4.
FUNKTIONEN
DER
CEA-VERWANDTEN
ANTIGENE
.
12
5.
BESONDERHEITEN
DES
BGP
.
14
6.
AUFGABENSTELLUNG
.
15
TEIL
B:
MATERIAL
UND
METHODEN
.
17
1.
MATERIALIEN
UND
BEZUGSQUELLEN
.
17
2.
HAEUFIG
VERWENDETE
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
19
3.
AUSGANGSMATERIAL
.
21
3.1.
ERSTELLEN
EINER
GEWEBEBANK
AUS
KOLOREKTALEN
KARZINOMEN
UND
KORRESPONDIERENDER
KOLON-NORMALSCHLEIMHAUT
.
21
3.2.
ERFASSUNG
VON
PATIENTENDATEN
UND
UNTERSUCHUNGSBEFUNDEN
.
21
4.
VERARBEITUNG
DES
AUSGANGSMATERIALES
.
21
4.1.
HOMOGENISATION
DER
GEWEBE
.
21
4.2.
PROTEINFRAKTION
NACH
GITC-EXTRAKTION
UND
DICHTEGRADIENTEN
ZENTRIFUGATION
.
22
4.3.
TRITON
X-100
DETERGENTIENEXTRAKTION
.
22
4.4.
UMSALZEN
UND
EINENGUNG
DES
PROTEIN-DETERGENTIENEXTRAKTES
.
22
4.5.
VERARBEITUNG
DER
PROBEN
FUER
DIE
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
MIT
IMMOBILISIERTEM
MAB
T84.1
.
22
5.
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
23
5.1.
KOPPLUNG
EINER
AFFINITAETSMATRIX
MIT
DEM
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
T84.1-E3
.
23
5.2.
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE-LAEUFE
.
23
5.2.1.
MAB
T84.1
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
23
5.2.2.
ABSORPTION
DES
BGP-A2-DOMAENEN-ANTISERUMS
GEGEN
IMMOBILISIERTES
CEA
UND
SS-GALACTOSIDASE
.
24
5.2.3.
ALBUMIN-ABSORPTION
UEBER
HITRAP-AFFINITAETSSAEULE
.
24
6.
QUANTIFIZIERUNG
DES
GESAMTPROTEINGEHALTES
DER
PROBEN
.
24
6.1.
GESAMTPROTEINKONZENTRATIONS-BESTIMMUNGEN
.
24
7.
ELEKTROPHORESE
IM
DISKONTINUIERLICHEN
NATRIUM-DODECYL-SULFAT-POLYACRYLAMIDGEL
(SDS-PAGE)
.
25
7.1.
VERSUCHSAUFBAU
.
25
7.2.
VORBEREITUNG
DER
PROBEN
.
25
7.2.1.
LYOPHILISIERTE
PROBEN
.
25
7.2.2.
PROBEN
IN
PROBENPUFFER
.
25
7.3.
MOLEKULARGEWICHTSSTANDARDS
.
26
7.4.
ELEKTROPHORESE
.
26
8.
ELEKTROPHORETISCHER
TRANSFER
DER
IM
POLYACRYLAMIDGEL
AUFGETRENNTEN
PROTEINE
AUF
NITROCELLULOSEFOLIE
(WESTERN
BLOT)
.
26
8.1.
VERSUCHSAUFBAU
.
26
9.
DETEKTION
VON
AUF
NITROZELLULOSEFOLIE
IMMOBILISIERTEN
PROTEINEN
.
27
9.1.
FAERBUNG
MIT
AMIDOSCHWARZ
.
27
9.2.
IMMUNCHEMISCHE
FAERBUNG
VON
WESTERN
BLOTS
MIT
VERSCHIEDENEN
ANTIKOERPERN
(IMMUNOBLOTS)
.
28
9.2.1.
BLOCKADE
UNPEZIFISCHER
BINDUNGSSTELLEN
.
28
9.4.
INKUBATION
MIT
DEM
1.
ANTIKOERPER
.
28
9.5.
INKUBATION
MIT
DEM
2.
ANTIKOERPER
.
28
9.6.
INKUBATION
MIT
STREPTAVIDIN,
POD-KONJUGIERT
.
29
9.7.
FAERBEREAKTION
MIT
3,3'-DIAMINOBENZIDIN
.
29
9.8.
DETEKTION
MITTELS
CHEMOLUMINISZENZ
.
29
10.
BERECHNUNG
DER
MOLEKULARGEWICHTE
.
30
TEIL
C:
ERGEBNISSE
.
31
1.
ERSTELLEN
EINER
GEWEBEBANK
AUS
KOLOREKTALEN
KARZINOMEN
UND
KORRESPONDIERENDER
KOLON-NORMALSCHLEIMHAUT
.
31
1.1.
PATIENTEN
.
31
1.2.
LOKALISATION
UND
PATHOLOGIE
DER
TUMOREN
.
31
1.3.
TABELLE
1:
POSTOPERATIVE
HISTOPATHOLOGISCHE
TUMORSTADIENEINTEILUNG
.
32
1.4.
TABELLE
2:
TUMORBANK
DATEN
ZU
DEN
PATIENTEN
SOWIE
HISTOPATHOLOGISCHE
BEFUNDE
.
32
2.
VERARBEITUNG
DER
TUMOR
UND
NORMALSCHLEIMHAUTPROBEN
AUS
DER
GEWEBEBANK
.
33
2.1.
VERGLEICH
VON
PROTEINFRAKTIONEN
NACH
CSCL-ULTRAZENTRIFUGATION
UND
DETERGENTIENEXTRAKTION
.
33
2.2.
TRITON
X-100
DETERGENTIENEXTRAKTION
.
34
2.3.
AUSBEUTE
.
35
3.
EMPFINDLICHKEITSSTEIGERUNG
DER
IMMUNCHEMISCHEN
DETEKTION
.
35
3.1.
OPTIMIERUNG
DER
TRANSFERBEDINGUNGEN
IM
WESTERN
BLOT
.
36
3.2.
CHROMATOGRAPHISCHE
ABSORPTION
UNSPEZIFISCHER
PROTEINE
.
36
3.3.
EMPFMDLICHKEITSSTEIGERUNG
MITTELS
CHEMOLUMINISZENZ-DETEKTIONSREAKTION
.36
3.4.
EMPFINDLICHKEITSSTEIGERUNG
MITTELS
BIOTINYLIERTER
2.
ANTIKOERPER
.
38
4.
BGP-ISOFORMEN
IN
KOLOREKTALEN
KARZINOMEN
UND
IHRER
KORRESPONDIERENDEN
NORMALSCHLEIMHAUT
.
39
5.
BINDUNG
VON
MAB
4D1.C2
.
39
5.1.
BINDUNG
AN
GEWEBEEXTRAKT
VON
NORMALER
KOLONSCHLEIMHAUT
.
42
5.2.
BINDUNG
AN
GEWEBEEXTRAKT
VON
KOLOREKTALEN
KARZINOMEN
VERLUST
DES
164
KD
ANTIGENS
.
43
5.3.
TABELLE
3:
REDUKTION
BZW.
VERLUST
DER
164
KD
BGP-ISOFORM
IN
KOLOREKTALEN
KARZINOMEN
IM
VERGLEICH
ZUR
KORRESPONDIERENDEN
NORMALSCHLEIMHAUT
.
44
5.4.
BINDUNG
AN
WEITERE
ANTIGENE
IN
GEWEBEEXTRAKT
VON
KOLOREKTALEN
KARZINOMEN
.
45
6.
BINDUNG
DES
BGP-A2-DOMAENEN-ANTISERUMS
.
45
6.1.
BINDUNG
AN
GEWEBEEXTRAKT
VON
NORMALER
KOLONSCHLEIMHAUT
.
47
6.2.
BINDUNG
AN
GEWEBEEXTRAKT
VON
KOLOREKTALEN
KARZINOMEN
.
47
7.
BINDUNG
DES
TQ-PEPTID-ANTISERUMS
UND
DES
BGP-CYTOPLASMATISCHE-DOMAENEN
ANTISERUMS
.
47
7.1.
BINDUNG
AN
GEWEBEEXTRAKT
VON
NORMALER
KOLONSCHLEIMHAUT
.
48
7.2.
BINDUNG
AN
GEWEBEEXTRAKT
VON
KOLOREKTALEN
KARZINOMEN
.
48
8.
IMMUNAFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE
AUFREINIGUNG
UEBER
EIN
T84.L-IMMUNABSORBENS.49
8.1.
BINDUNG
DES
MAB
4D1.C2
AN
DAS
ELUAT
NACH
T84.1
AFFMITAETSCHROMATOGRAPHIE
AUS
NORMALER
KOLONSCHLEIMHAUT
.
49
8.2.
BINDUNG
DES
MAB
4D1.C2
AN
DIE
FRAKTIONEN
DER
T84.1
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
AUS
TUMORGEWEBE
.
50
9.
BINDUNG
VON
MAB
BURTIN
33
.
51
9.1.
BINDUNG
AN
GEWEBEEXTRAKT
VON
NORMALER
KOLONSCHLEIMHAUT
UND
KOLOREKTALEN
KARZINOMEN
.
51
TEIL
D:
DISKUSSION
.
53
TEIL
E:
ZUSAMMENFASSUNG
.
68
LITERATURVERZEICHNIS
.
70
DANKSAGUNG
LEBENSLAUF |
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