Untersuchung der genetischen Stabilität von Solanum-Kalluskulturen und Kartoffelpflanzen aus Protoplastenfusionen sowie von Nicotiana-Zellkulturen:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
15
2.1.
MATERIAL
UND
GERAETE
.
15
2.1.1.
PFLANZENMATERIAL
.
15
2.1.1.1.
KARTOFFELZUCHTLINIEN,
LANDSORTEN
UND
WILDART
.
15
2.1.1.1.1.
PROTOPLASTENVERSUCHE
.
15
2.1.1.1.2.
AUSGANGSMATERIAL
FUER
KALLUSBILDUNG
.
16
2.1.1.2.
NICOTIANA
SPP.-ZELLKULTUREN
.
16
2.1.2.
BAKTERIENSTAEMME
UND
PLASMIDE
.
17
2.1.3.
OLIGONUKLEOTID-SONDEN
.
18
2.1.4.
GERAETE,
CHEMIKALIEN
UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
18
2.2.
PROTOPLASTENVERFAHREN
UND
GEWEBEKULTUREN
.
20
2.2.1.
KULTURMEDIEN
.
20
2.2.2.
VERMEHRUNG
UND
ERHALTUNG
VON
PFLANZENMATERIAL
.
23
2.2.2.1.
SPROSSKULTUREN
VON
SOLANUM
TUBEROSUM
.
23
22.2.2.
KALLUSKULTUREN
VON
SOLANUM
SPP
.
23
2.2.2.3.
KALLUSKULTUREN
VON
NICOTIANA
SPP
.
23
2.2.3.
KALLUSKULTURTECHNIK
.
23
2.2.3.1.
ANLEGEN
EINER
KALLUSKULTUR
AUS
KARTOFFELBLAETTEM
.
23
2.2.3.2.
KALLUSKULTUR
IN
ANWESENHEIT
VON
2,
4-DICHLORPHENOXYESSIGSAEURE
.
24
2.2.3.3.
REGENERATION
VON
PFLANZEN
AUS
KALLI
.
24
2.2.4.
ISOLIERUNG,
FUSION
VON PROTOPLASTEN
UND
PFLANZENREGENERATION
.
25
2.2.4.1.
ISOLIERUNG
VON
MESOPHYLLPROTOPLASTEN
AUS
SOLANUM
TUBEROSUM-ZUCHT
LINIEN
.
25
2.2.4.2.
ELEKTROFUSION
VON
PROTOPLASTEN
.
26
2.2.4.3.
EINBETTEN
DER
PROTOPLASTEN
IN
NA-ALGINAT
UND
BEFREIEN
DER
KOLONIEN
.
27
2.2.4.4.
AUSPFLANZEN
VON
REGENERATEN
IM
GEWAECHSHAUS
UND
IM
FELD
.
28
2.3.
VERFAHREN
ZUR
CHARAKTERISIERUNG
DES
PFLANZENMATERIALS
.
28
2.3.1.
CYTOLOGISCHE
ANALYSE
.
28
2.3.1.1.
BESTIMMUNG
DER
CHLOROPLASTENZAHL
IN
DEN
STOMATA
.
28
2.3.1.2.
BESTIMMUNG
DER
POLLENKEIMUNG
UND
VITALITAET
.
29
2.3.2.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE-ANALYSE
.
29
2.3.3.
MOLEKULARGENETISCHE
METHODEN
.
30
2.3.3.1.
DNA-ISOLIERUNG
AUS
PFLANZEN
.
30
2.3.3.2.
DNA-ISOLIERUNG
AUS
KALLUS
.
31
2.3.3.3.
BESTIMMUNG
DER
DNA
KONZENTRATION
.
32
2.3.3.4.
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
.
32
2.3.3.5.
RESTRIKTIONSENZYMVERDAU
VON
GENOMISCHER
DNA
.
33
2.3.3.6.
DNA-GELELEKTROPHORESE
.
33
2.3.3.7.
DNA-TRANSFER
AUF
TRAEGERMEMBRAN
.
34
2.3.3.8.
HERSTELLUNG
VON
DIG-MARKIERTEN
DNA-SONDEN
.
34
2.3.3.9.
HYBRIDISIERUNG
MIT
DIG-DNA-SONDEN
AUF
EINER
NYLON-MEMBRAN
.
36
2.3.3.9.1.
HYBRIDISIERUNG
MIT
OLIGONUKLEOTIDEN
.
36
2.3.3.9.2.
HYBRIDISIERUNG
MIT
RIBOSOMALEN
DNA-SONDEN
.
37
2.3.3.10.
SIGNAL-DETEKTION
FUER
OLIGONUKLEOTID
UND
RDNA-SONDEN
.
38
2.3.3.11.
ENTFERNUNG
DER
DIG-SONDE
UND
REHYBRIDISIERUNG
.
39
2.3.3.11.1.
ENTFERNUNG
NACH
DER
DETEKTION
MIT
CHEMILUMINESZENZ
.
40
2.3.3.11.2.
ENTFERNUNG
NACH
DER
DETEKTION
MIT
NBT
UND
X-PHOSPHAT
.
40
3.
ERGEBNISSE
.
41
3.1.
METHODISCHE
ASPEKTE
.
41
3.1.1.
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-DNA
AUS
KALLI
.
41
3.1.2.
ENTFERNUNG
DER
DNA-SONDE
FUER
WEITERE
REHYBRIDISIERUNGEN
.
42
3.1.3.
NACHWEISEMPFINDLICHKEIT
DER
CHEMILUMINESZENZ-DETEKTION
.
43
3.2.
CHARAKTERISIERUNG
VON
NICOTIANA
SPP.
UND
NICOTIANA
TABACUM
ZELLKULTUREN
.
43
3.2.1.
SUCHE
NACH
EINEM
SPEZIFISCHEN
DNA-FINGERPRINTING
FUER
DIE
NICOTIANA-AITEN
BZW.
NICOTIANA
TABACUM-LINIEN
.
44
3.2.1.1.
CHARAKTERISIERUNG
VON
VERSCHIEDENEN
NICOTIANA
ARTEN
MITTELS
RFLP
ANALYSE
.
44
3.2.1.1.1.
HYBRIDISIERUNG
MIT
DER
RDNA-SONDE
PRZ25
.
45
3.2.1.1.2.
HYBRIDISIERUNG
MIT
OLIGONUKLEOTID-SONDEN
.
47
3.2.1.2.
CHARAKTERISIERUNG
VERSCHIEDENER
NICOTIANA
TA&ZCWN-KALLUSKULTUREN
UND
EINER
KALLUSKULTUR
VON
EINER
HYBRIDPFLANZE
.
49
3.2.1.2.1.
HYBRIDISIERUNG
MIT
OLIGONUKLEOTID-SONDEN
.
49
3.2.1.2.2.
HYBRIDISIERUNG
MIT
RDNA-SONDEN
.
50
3.2.2.
UNTERSUCHUNG
DER
GENETISCHEN
STABILITAET
VON
NICOTIANA
TABACUM
STAMM
"BRUESSET'-ZELLKULTUREN
.
55
II
3.3.
EXPERIMENTE
ZUR
PROTOPLASTENFUSION
IN
KARTOFFEL
.
58
3.3.1.
ANALYSE
DER
ERSTEN
TEILUNGEN
DER
FUSIONIERTEN
PROTOPLASTEN
.
58
3.3.2.
EINFLUSS
DER
OSMOLARITAET
UND
DER
ANWESENHEIT
VON
BSA
IM
NAEHRMEDIUM
.
58
3.3.3.
REGENERATION
DER
FUSIONSPRODUKTE
.
58
3.4.
CHARAKTERISIERUNG
DER
REGENERATE
AUS
PROTOPLASTENFUSION
.
59
3.4.1.
EINTEILUNG
DER
REGENERATE
IN
HYBRID/NICHT-HYBRID
MITTELS
OLIGONU
KLEOTID-SONDE
.
59
3.4.2.
SOMAKLONALE
VARIATION
IN
REGENERATEN
AUS
PROTOPLASTENFUSION
.
60
3.4.2.1.
PHAENOTYPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
.
61
3.4.2.I.I.
KOMBINATIONBP31
+
BP
1076
.
63
3.4.2.1.2.
KOMBINATION
BP86
+
BP1
172
.
64
3.4.2.I.3.
KOMBINATION
BP
15
+
BP7
.
66
3.4.2.1.4.
KOMBINATION
BP86
+
BP2
.
68
3.4.2.2.
CHLOROPLASTENZAHL
.
69
3.4.2.2.1.
KOMBINATION
BP31
+
BP
1076
.
69
3.4.2.2.2.
KOMBINATION
BP86
+
BP1
172
.
69
3.4.2.2.3.
KOMBINATION
BP15
+
BP7
.
70
3.4.2.3.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE-ANALYSE.
BESTIMMUNG
DES
DNA-GEHALTES
UND
DER
PLOIDIESTUFE
.
71
3.4.2.3.1.
ZUSAMMENHANG
ZWISCHEN
PHAENOTYPISCHEN
VERAENDERUNGEN
UND
PLOIDIESTUFE
.
78
3.4.2.3.2.
UEBEREINSTIMMUNG
DER
CHLOROPLASTENZAHL
IN
DEN
STOMATA
MIT
DER
PLOIDIESTUFE
.
80
3.4.2.4.
POLLENVITALITAET
.
82
3.4.2.5.
RFLP-ANALYSE
.
83
3.4.2.5.1.
UNTERSUCHUNG
DER
REGENERATE
DER
KOMBINATION
BP3
1
+
BP
1076
.
84
3.4.2.5.2.
UNTERSUCHUNG
DER
REGENERATE
DER
KOMBINATION
BP86
+
BP
1172
.
86
3.4.2.5.3.
UNTERSUCHUNG
DER
REGENERATE
DER
KOMBINATION
BP
15
+
BP7
.
87
3.4.2.5.4.
UNTERSUCHUNG
AUSGEWAEHLTER
HYBRIDE
DER
KOMBINATION
BP86
+
BP2
.
94
3.4.2.6.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
MORPHOLOGISCHEN,
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHEN
UND
RFLP-ERGEBNISSE
.
94
3.5.
VERSUCHE
ZUR
INDUKTION
SOMAKLONALER
VARIATION
IN
KALLUS
KULTUREN
DURCH
ANWENDUNG
VON
2,4-DICHLORPHENOXYESSIGSAEURE
.
96
3.5.1.
EINFLUSS
VON
2,4-D
IN
KALLUSKULTUREN
VON
SOLANUM
SPP
.
97
3.5.1.1.
WIRKUNG
VON
2,4-D
BEI
DER
KALLUSENTWICKLUNG
.
97
HI
3.5.1.2.
NACHWEIS
VON
ABWEICHUNGEN
IN
KALLUSKULTUREN
VON
SOLANUM
SPP
.
97
3.5.1.2.1.
RFLP-ANALYSE
VON
SOLANUM
BULBOCASTANUM
.
99
3.5.1.2.2.
RFLP-ANALYSE
VON
SOLANUM
JUZEPZUKIT
.
101
3.5.1.2.3.
RFLP-ANALYSE
VON
SOLANUM
CURTTLOBUM
.
105
3.5.1.3.
VERSUCHE
ZUR
PFLANZENREGENERATION
AUS
KALLUSKULTUR
VON
SOLANUM
SPP
.
107
3.5.1.4.
ERGEBNISSE
DER
PFLANZENREGENERATION
AUS
KALLUSKULTUR
VON
SOLANUM
TUBEROSUM
ZUCHTLINIE
W18
.
110
3.5.1.4.1.
AUSBEUTE
VON
REGENERIERTEN
PFLANZEN
.
110
3.5.1.4.2.
RFLP-ANALYSE
DER
REGENERIERTEN
PFLANZEN
AUS
KALLUS
.
112
3
5.1.4.2.1.
RFLP-ERGEBNISSE
NACH
DRA
I-VERDAU
UND
(GATA)
4
-HYBRIDISIERUNG
.
113
3.5.1.4.2.2.
RFLP-ERGEBNISSE
NACH
DRA
I-VERDAU
UND
PRZ25-HYBRIDISIERUNG
.
114
4.
DISKUSSION
.
117
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
140
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
142
IV |
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author | Campos Castro, Verónica |
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