Nachweis der induzierbaren Stickstoffmonoxid-Synthase in Lebergewebe mittels nicht-radioaktiver In-situ-Hybridisierung und Immunhistochemie:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
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| Beschreibung: | Heidelberg, Univ., Diss., 1998 (Nicht für den Austausch) |
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3
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE:
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG
1.1 ENTDECKUNG VON STICKSTOFFMONOXID (NO) IM GEFASSENDOTHEL 6
1.2 BIOCHEMISCHE EIGENSCHAFTEN VON STICKSTOFFMONOXID 6
1.3 SYNTHESE UND REGULATION VON STICKSTOFFMONOXID 7
1.3.1 KONSTITUTIVE STICKSTOFFMONOXID-SYNTHASE (CNOS) 8
1.3.2 INDUZIERBARE STICKSTOFFMONOXID-SYNTHASE (INOS) 9
1.3.3 INHIBITION DER STICKSTOFFMONOXID-SYNTHASE 11
1.4 STICKSTOFFMONOXID IM ORGANISMUS 11
1.4.1 KARDIOVASKULAERES SYSTEM 11
1.4.2 IMMUNSYSTEM 12
1.4.3 N ERVENSYSTEM 13
1.4.4 LEBER 13
1,5 ZIEL DER ARBEIT 15
2 MATERIAL UND METHODEN
2.1 MATERIAL 16
2.1.1 CHEMIKALIEN 16
2.1.2 RESTRIKTIONSENZYME
UND SUBSTANZEN FUER MOLEKULARBIOLOGISCHE ANSAETZE 17
2.1.3 PLASMID ZUR HERSTELLUNG DER RNA-SONDE
ZUR DETEKTION VON INOS-MRNA 17
2.1.4 ZUSAMMENSETZUNG UND ANSATZ WICHTIGER LOESUNGEN 19
2.1.5 PATIENTENKOLLEKTIV 20
2.2 METHODEN 21
2.2.1 METHODISCHER HINTERGRUND 21
2.2.1.1
IN .///-HYBRIDISIERUNG (ISH) 21
2.2.1.2 IMMUNHISTOCHEMIE (IHC) 23
2.2.2 FIXIERUNG VON LEBERGEWEBE AUF OBJEKTTRAEGERN 24
2.2.3 HERSTELLUNG DER RNA-SONDEN FUER DIE
IN ///-HYBRIDISIERUNG 25
2.2.4
IN .///-HYBRIDISIERUNG ZUR DETEKTION VON INOS-MRNA IN LEBERGEWEBE 31
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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4
2.2.5 IMMUNHISTOCHEMIE ZUR DETEKTION VON INOS IN LEBERGEWEBE 33
3. ERGEBNISSE
3.1 OPTIMIERUNG DER
IN 5/FTT-HYBRIDISIERUNG 3 5
3.1.1 SCHNITTDICKE 35
3.1.2 GEWEBEFIXIERUNG 3 5
3.1.3 INKUBATION MIT 0,2 N HCL 3 5
3.1.4 PROTEINASE K 36
3.1.5 TROCKNUNG DER PRAEPARATE VOR DER HYBRIDISIERUNG 36
3.1.6 HYBRIDISIERUNGSTEMPERATUR 3 6
3.1.7 GROESSE UND KONZENTRATION DER RNA-SONDE 37
3.2 OPTIMIERUNG DER IMMUNHISTOCHEMIE 38
3.2.1 SCHNITTDICKE 38
3.2.2 GEWEBEFIXIERUNG 38
3.2.3 TROCKNUNG DER PRAEPARATE VOR DER GEWEBEFIXIERUNG 38
3.3
IN .^/-HYBRIDISIERUNG VON INOS-MRNA IN GEFRIERLEBERSCHNITTEN 39
3.4 IMMUNHISTOCHEMIE VON INOS IN GEFRIERLEBERSCHNITTEN 45
4. DISKUSSION
4.1 ZIELE DER ARBEIT 51
4.2 OPTIMIERUNG DER METHODEN 51
4.3 KONTROLLEN 52
4.4 AUSSAGEKRAFT DES INOS-MRNA- BZW. DES INOS-PROTEIN- NACHWEISES 53
5 ZUSAMMENFASSUNG 55
6 LITERATURVERZEICHNIS 57
7. LEBENSLAUF 69
8. DANKSAGUNG 70 |
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