Expression und Funktion von Homeobox- und bHLH-Transkriptionsfaktoren bei malignen Gliomen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2012
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1.1
MALIGNE
GLIOME
...................................................................................................................
7
1.2
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
........................................................................................................
7
1.2.1
DIE
BEDEUTUNG
VON
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
FUER
DIE
TUMORBIOLOGIE
...........................
8
1.2.2
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
DER
HOMEOBOX-GRUPPE
..........................................................
9
1.2.2.1
DISTAL-LESS
{DLX
/
DIX)
........................................................................................
10
1.2.2.2
EMPTY-SPIRACLES
{EMX
/
EMX)
.............................................................................
12
1.2.2.3
PAIRED-BOX
(PAX/PAX)
......................................................................................
14
1.2.3
BASIC-HELIX-LOOP-HELIX(BHLH)-TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
.........................................
19
1.2.3.1
MAMMALIAN
ACHAETE-SCUTE
HOMOLOGUE
1
(HASHI
/
MASH
1)
..............................
20
1.2.3.2
NEUROGENIN
{NGN
/
NGN)
...................................................................................
22
1.2.3.3
OLIG
/OLIG
.........................................................................................................
23
1.4
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.......................................................................................................
24
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.......................................................................
25
2.1
MATERIAL
............................................................................................................................
25
2.1.1
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
..........................................................................................
25
2.1.2
ANTIKOERPER
..................................................................................................................
27
2.1.2.1
PRIMAERANTIKOERPER
..................................................................................................
27
2.1.2.2
SEKUNDAERANTIKOERPER
............................................................................................
27
2.1.3
PRIMER
.........................................................................................................................
28
2.1.4
PLASMIDE
.....................................................................................................................
29
2.1.5
SIRNA
MOLEKUELE
........................................................................................................
30
2.1.6
ARBEITSGERAETE
..............................................................................................................
30
2.1.7
SONSTIGE
MATERIALIEN
...................................................................................................
31
2.1.8
VERWENDETE
ZELLLINIEN
................................................................................................
32
2.2
METHODEN
...........................................................................................................................
33
2.2.1
ZELLKULTUR
....................................................................................................................
33
2.2.1.1
ALLGEMEINES
.........................................................................................................
33
2.2.1.2
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
...........................................................................................
33
2.2.1.3
EINFRIEREN
VON
ZELLEN
..........................................................................................
33
2.2.1.5
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
...................................................................................
34
2.2.1.6
ZELLZYKLUSBESTIMMUNG
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS)
.........................
34
2.2.1.7
WACHSTUMSKURVEN
...............................................................................................
35
2.2.1.8
LDH-ASSAY
..........................................................................................................
36
2.2.1.9
UNTERSUCHUNG
AUF
ZYTOTOXIZITAET
..........................................................................
37
2.2.1.10
HYPOXIEINDUZIERTER
ZELLTOD
..............................................................................
37
2.2.1.11
.
..........................................................................................................................
38
2.2.1.12
TRANSFEKTION
VON
ZELLLINIEN
MIT
DEM
TRANSFEKTIONSREAGENZ
FUGENE
6
.......
38
2.2.1.13
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
ZELLEN
MIT
DEM
TRANSFEKTIONSREAGENZ
METAFECTENE
PRO
...............................................................................................................
38
2.2.2
PROTEINBIOCHEMIE
........................................................................................................
39
2.2.2.1
HERSTELLUNG
VON
PROTEINLYSATEN
AUS
ZELLLINIEN
..................................................
39
2.2.2.2
KERNEXTRAKTE
........................................................................................................
39
2.2.2.3
SPEZIFISCHE
ISOLIERUNG
VON
DNA-GEBUNDENEN
PROTEINEN
...................................
40
2.2.2.4
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
.....................................................................
40
2.2.2.5
SDS-PAGE
..........................................................................................................
41
2.2.2.6
IMMUNOBLOT
.........................................................................................................
42
2.2.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
...............................................................................
43
2.2.3.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
..............................................................................
43
2.2.3.2
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
...............................................
43
2.2.3.3
.
...........................................................................................................................
43
2.2.3.4
REVERSE
TRANSKRIPTION
........................................................................................
44
2.2.3.5
QUANTITATIVE
REALTIME-PCR
................................................................................
45
2.2.4
TIERVERSUCHE
...............................................................................................................
46
2.2.4.1
INOKULATION
VON
SMA560
IN
SYNGENE
VMDK-MAEUSE
.......................................
46
2.3
STATISTISCHE
ANALYSEN
........................................................................................................
46
3
ERGEBNISSE
...........................................................................................
47
3.1
EXPRESSIONSANALYSEN
.........................................................................................................
47
3.1.1
DLX1
/DIXL
...............................................................................................................
47
3.1.2
EMX2
/
EMX2
............................................................................................................
49
3.1.3
HASHL/MASHL
..........................................................................................................
50
3.1.4
NGN2/NGN2
.............................................................................................................
52
3.1.5
OLIG2/OLIG2
............................................................................................................
53
3.1.6
...............................................................................................................................................
55
3.1.6.1
PAX2/PAX2
........................................................................................................
55
3.
1.
6.2
PAX5/PAX5
........................................................................................................
57
3.1.6.3
PAX6/PAX6
........................................................................................................
58
3.1.6.4
PAX8
/
................................................................................................................
60
3.2
PAX2
/
PAX
2-TRANSFEKTANTEN
............................................................................................
61
3.2.1
WACHSTUMSKURVEN
.....................................................................................................
64
3.2.1.1
A172
....................................................................................................................
64
3.2.1.2
LN-18
..................................................................................................................
65
3.2.1.3
LNT-229
..............................................................................................................
67
3.2.1.4
U88MG
................................................................................................................
68
3.2.1.5
SMA560
..............................................................................................................
69
3.2.2.1
A172
....................................................................................................................
70
3.2.2.2
LN-18
..................................................................................................................
71
3.2.2.3
LNT-229
..............................................................................................................
71
3.2.2.4
U88MG
................................................................................................................
72
3.2.2.5
SMA560
..............................................................................................................
72
3.2.3
ZELLZYKLUSANALYSEN
....................................................................................................
73
3.2.3.1
LNT-229
..............................................................................................................
74
3.2.3.2
SMA560
.............................................................................................................
75
3.2.4
SENSIBILITAET
GEGENUEBER
ZYTOSTATIKA
............................................................................
76
3.2.4.1
LNT-229
.............................................................................................................
77
3.2.4.1.1
CISPLATIN
......................................................................................................
77
3.2.4.1.2
VINCRISTIN
.....................................................................................................
78
3.2.4.2
SMA560
.............................................................................................................
79
3.2.4.2.1
CISPLATIN
......................................................................................................
79
3.2.4.2.2
VINCRISTIN
.....................................................................................................
80
3.2.5
HYPOXIEEMPFINDLICHKEIT
.......................................................................
81
3.2.5.
1
LNT-229
.............................................................................................................
81
3.2.5.2
SMA560
.............................................................................................................
84
3.2.6
KLONOGENITAET
DER
SMA560
TRANSFEKTANTEN
...............................................................
86
3.2.7
SYMPTOMFREIES
UEBERLEBEN
VON
VMDK-MAEUSEN
MIT
ORTHOTOP
IMPLANTIERTEN
SMA560-PAX2
ODER
SMA560-PURO
GLIOMZELLEN
.............................................................
87
3.3
HERUNTERREGULATION
DER
PAX2-EXPRESSION
DURCH
TRANSIENTE
PAX2-SPEZIFISCHE
SIRNA
TRANSFEKTION
............................................................................................................................
88
3.3.1
VERMINDERTE
EXPRESSION
VON
PAX2
NACH
TRANSIENTER
TRANSFEKTION
VON
PAX
SPEZIFISCHEN
SIRNA
MOLEKUELEN
IN
STABILEN
PAX2
TRANSFEKTANTEN
....................................
88
3.3.2
ABHAENGIGKEIT
DER
GDNF
EXPRESSION
VON
DER
HOEHE
DER
PAX2
EXPRESSION
...........
89
3.3.3
AUSWIRKUNG
DER
PAX2
HERUNTERREGULATION
AUF
DAS
WACHSTUM
DER
GLIOBLASTOMLINIE
A172
....................................................................................................................................
90
3.3.4
AUSWIRKUNG
DER
PAX2
HERUNTERREGULATION
AUF
DAS
WACHSTUM
AUF
ZELLEN
DER
GLIOBLASTOMLINIE
T98G
.......................................................................................................
92
3.3.4.1
LICHTMIKROSKOPISCH
BEOBACHTBARE
AUSWIRKUNGEN
AUF
DIE
ZELLMORPHOLOGIE
...
94
3.3.4.2
AUSWIRKUNGEN
AUF
ZELLZYKLUS
UND
ZELLTOD
.........................................................
95
3.3.5
AUSWIRKUNG
DER
PAX2
HERUNTERREGULATION
AUF
ZELLEN
DER
MEDULLOBLASTOMLINIE
DAOY
.....................................................................................................................................
96
3.3.5.1
AUSWIRKUNGEN
AUF
DIE
WACHSTUMSGESCHWINDIGKEIT
.........................................
96
3.3.5.2
LICHTMIKROSKOPISCH
BEOBACHTBARE
AUSWIRKUNGEN
AUF
DIE
ZELLMORPHOLOGIE
...
98
3.3.5.3
AUSWIRKUNGEN
AUF
ZELLZYKLUS
UND
ZELLTOD
........................................................
99
3.4
IN
SILICO
ANALYSEN
DER
ONCOMINE
DATENBANK
...................................................................
99
4
DISKUSSION
.........................................................................................
102
4.1
EXPRESSIONSANALYSEN
........................................................................................................
102
4.1.1
DLX1
/
DIXL
..............................................................................................................
104
4.1.2
EMX2
/
EMX2
..........................................................................................................
105
4.1.3
HASHL
/MASHL
........................................................................................................
105
4.1.4
NGN2/NGN2
...........................................................................................................
106
4.1.5
OLIG2
/
OLIG2
..........................................................................................................
106
4.1.6
PAX2
/
PAX2
.............................................................................................................
107
4.1.7PAX5/PAX5
.............................................................................................................
108
4.1.8PAX6/PAX6
.............................................................................................................
109
4.1.9
PAX8
/
PAX8
.............................................................................................................
HO
4.1.10
UEBERSICHT
UEBER
DAS
EXPRESSIONSMUSTER
DER
UNTERSUCHTEN
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
..
110
4.1.11
IN
SILICO
ANALYSEN
DER
ONCOMINE
DATENBANK
........................................................
112
4.2
UEBEREXPRESSION
VON
PAX2
/
PAX2
BEI
MALIGNEN
GLIOMZELLLINIEN
.................................
113
4.2.1
AUSWIRKUNG
AUF
DIE
PROLIFERATIONSRATE
SOWIE
ZELLTODRATE
.....................................
113
4.2.2
AUSWIRKUNG
AUF
DIE
AUFTEILUNG
IN
DIE
EINZELNEN
ZELLZYKLEN
...............................
114
4.2.3
AUSWIRKUNG
AUF
DIE
EMPFINDLICHKEIT
GEGENUEBER
ZYTOSTATIKA
..............................
114
4.2.4
AUSWIRKUNG
AUF
DIE
EMPFINDLICHKEIT
GEGENUEBER
HYPOXIE
...................................
1
15
4.2.5
AUSWIRKUNG
AUF
DIE
KLONOGENITAET
VON
SMA560
ZELLEN
......................................
1
15
4.2.6
EFFEKT
DER
UEBEREXPRESSION
VON
PAX2
IN
VIVO
..........................................................
116
4.3
AUSWIRKUNG
EINER
HERUNTERREGULATION
DER
PAX2-EXPRESSION
UEBER
EINE
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
MIT
PAX2
SPEZIFISCHEN
SIRNA
MOLEKUELEN
......................................................
116
4.3.1
AUSWIRKUNG
AUF
ZELLPROLIFERATION
UND
ZELLTOD
........................................................
116
4.4
LITERATURVERGLEICH
DER
...................................................................................................
118
5
ZUSAMMENFASSUNG
............................................................................
120
6
LITERATUR
...............................................................................................
121
7
ANHANG
................................................................
133
7.1
ABKUERZUNGEN
UND
ANGLIZISMEN
.......................................................................................
133
8
DANKSAGUNG
.......................................................................................
135
|
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