Die simultane Inkubation mit exogenen und endogenen Toll-like Rezeptor-Liganden bedingt eine Aggravierung des Schädigungsmusters:
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| adam_text | AUS DEM LEHRSTUHL
FUER INNERE MEDIZIN II
PROF. DR. MED. L. MAIER
DER FAKULTAET FUER MEDIZIN
DER UNIVERSITAET REGENSBURG
DIE SIMULTANE INKUBATION MIT EXOGENEN UND ENDOGENEN
TOLL-LIKE REZEPTOR-LIGANDEN BEDINGT EINE AGGRAVIERUNG DES
SCHAEDIGUNGSMUSTERS
INAUGURAL - DISSERTATION
ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES
DER MEDIZIN
DER
FAKULTAET FUER MEDIZIN
DER UNIVERSITAET REGENSBURG
VORGELEGT VON
FELIX BOURIER
2014
HTTP://D-NB.INFO/105605526X
INHALT
I
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
1.1 ANGEBORENE IMMUNITAET UND TOLL-LIKE REZEPTOR-SYSTEM(TLR) 2
1.1.1 STRUKTUR DER TOLL-LIKE REZEPTOREN UND IHRE LIGANDEN 3
1.1.2 SIGNALWEGE NACH TLR-AKTIVIERUNG 4
1.1.2.1 MYD88-ABHAENGIGER SIGNALWEG 5
1.1.2.2 MYD88-UNABHAENGIGER SIGNALWEG 6
1.1.3 BEISPIELE KLINISCHER BEDEUTUNG 7
1.2 ISCHAEMIE/REPERFUSIONSSCHADEN IM RAHMEN DER NIERENTRANSPLANTATION 8
1.2.1 DIREKTE ZELLSCHAEDIGUNG DURCH HYPOXIE UND RADIKALE
SAUERSTOFFSPEZIES 9
1.2.2 SCHAEDIGUNG IM RAHMEN VON ENDOTHELIALER DYSFUNKTION UND MEDIATOREN
10
1.2.3 SCHAEDIGUNGSMECHANISMEN DER ANGEBORENEN IMMUNITAET 11
1.3 WISSENSCHAFTLICHES THEMA DER ARBEIT UND ZIELSETZUNG 13
2. MATERIAL & METHODEN 15
2.1 MATERIAL 15
2.1.1 ZELLKULTUR 15
2.1.1.1 ZELLLINIEN 15
2.1.1.2 ZELLKULTURMEDIEN UND ZUSATZSTOFFE 15
2.1.1.3 EXOGENE UND ENDOGENE TLR-LIGANDEN 16
2.1.2 CHEMIKALIEN & KITS 17
2.1.3 PUFFER & LOESUNGEN 20
2.1.4 VERBRAUCHSMATERIAL 24
2.1.5 GERAETE 25
2.1.6 SOFTWARE 26
2.2 METHODEN 27
INHALT II
2.2.1 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 27
2.2.1.1 KULTUR, SPLITTEN UND AUSSAAT DER ZELLEN 27
2.2.1.2 KRYOKONSERVIERUNG UND AUFTAUEN DER ZELLEN 28
2.2.1.3 SIRNA-TRANSFEKTION 29
2.2.2 INKUBATION VON ZELLEN MIT TLR-LIGANDEN 29
2.2.3 MESSENGER RNA-ANALYSE 35
2.2.3.1 ISOLATION VON RNA AUS ZELLEN 35
2.2.3.2 REVERSE TRANSKRIPTION 37
2.2.3.3 QUANTITATIVE POLYMERASEKETTENREAKTION 38
2.2.4 PROTEINBIOCHEMISCHE ANALYSEN 40
2.2.4.1 ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY 40
2.2.4.2 WESTERN BLOT 42
2.2.4.2.1 ISOLATION UND BESTIMMUNG VON GESAMTPROTEIN AUS ZELLEN 43
2.2.4.2.2 SODIUM-DODECYLSULFAT POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 44
2.2.4.2.3 BLOTTING 45
2.2.4.2.4 IMMUNDETEKTION 45
2.3 STATISTISCHE ANALYSE 47
3. ERGEBNISSE 48
3.1 ANALYSE DER MRNA-EXPRESSION NACH PODOZYTEN-INKUBATION 49
3.1.1 TLR-EXPRESSIONSMUSTER NACH SEPARATER UND SIMULTANER INKUBATION MIT
EXOGENEN LIGANDEN 49
3.1.2 INDUKTION NUKLEAERER TRANSKRIPTIONSFAKTOREN NACH SEPARATER UND
SIMULTANER
INKUBATION MIT EXOGENEN UND ENDOGENEN TLR-LIGANDEN 50
3.1.3 PROINFLAMMATORISCHES ZYTO- UND CHEMOKIN-EXPRESSIONSMUSTER NACH
SEPARATER
UND SIMULTANER INKUBATION MIT EXOGENEN UND ENDOGENEN TLR-LIGANDEN 51
3.2 ANALYSE DER MRNA- UND PROTEIN-EXPRESSION DER IMCD-ZELLLINIE 52
INHALT III
3.2.1 CHEMOKIN MRNA- UND PROTEIN-EXPRESSION IN ABHAENGIGKEIT VON
KONZENTRATION
EXOGENER UND ENDOGENER STIMULANZIEN UND INKUBATIONSDAUER 52
3.2.2 PROINFLAMMATORISCHE MRNA- UND PROTEIN-EXPRESSION NACH SEPARATER
UND
SIMULTANER INKUBATION MIT EXOGENEN UND ENDOGENEN TLR-LIGANDEN 53
3.2.3 AUSWIRKUNG TLR-SPEZIFISCHER SIRNA AUF DIE CHEMOKIN-EXPRESSION 55
3.3 ANALYSE DER MRNA- UND PROTEIN-EXPRESSION DER WEHI-ZELLLINIE 57
3.3.1 MOLEKULARBIOLOGISCHER NACHWEIS DER TLR4- UND TNFA-EXPRESSION 57
3.3.2 CHEMOKIN MRNA-EXPRESSION IN ABHAENGIGKEIT VON KONZENTRATION
EXOGENER
UND ENDOGENER STIMULANZIEN UND INKUBATIONSDAUER 58
3.3.3 PROINFLAMMATORISCHE MRNA- UND PROTEIN-EXPRESSION NACH SEPARATER
UND
SIMULTANER INKUBATION MIT EXOGENEN UND ENDOGENEN TLR-LIGANDEN 59
4. DISKUSSION 61
4.1 POTENZIERTER PROINFLAMMATORISCHER EFFEKT NACH SIMULTANER EXOGENER
UND
ENDOGENER TLR-AKTIVIERUNG 61
4.2 REDUKTION DER ZYTO- UND CHEMOKINEXPRESSION DURCH TLR2/4-SPEZIFISCHEN
GEN-KNOCKDOWN 64
4.3 TRANSPLANTATIONSMEDIZINISCHE BEDEUTUNG DER RESULTATE 64
5. ZUSAMMENFASSUNG 66
LITERATURVERZEICHNIS IV
ABBILDUNGSVERZEICHNIS XI
TABELLENVERZEICHNIS XIII
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS XIV
DANKSAGUNG XVII
ERKLAERUNG XVIII
LEBENSLAUF XIX
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