Herstellung eines monoklonalen Antikörpers gegen felines MHC II und dessen immunhistologische Anwendung:
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| Sprache: | English |
| Veröffentlicht: |
Gießen
DVG-Service
2008
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
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| Beschreibung: | III, 210 S. Ill., graph. Darst. 21 cm |
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis I
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATURÜBERSICHT 2
2.1 Der Haupthistokompatibilitätskomplex (MHC) 2
2.1.1 Einführung zum Haupthistokompatibilitätskomplex 2
2.1.2 Genom des MHC 4
2.1.2.1 Anordnung und Bezeichnung der MHC-Gene 4
2.1.2.2 Polymorphismus der MHC-Gene 5
2.1.3 Struktur der MHC-Antigene 6
2.1.3.1 MHC Klasse I-Antigene 6
2.1.3.2 MHC Klasse II-Antigene 7
2.1.4 Expression der MHC Klasse II-Antigene in humanen Geweben 8
2.1.4.1 Lymphatische Gewebe und periphere Leukozyten, Knochenmark 8
2.1.4.1.1 Milz, Lymphknoten, periphere Leukozyten 8
2.1.4.1.2 Thymus 9
2.1.4.1.3 Knochenmark 9
2.1.4.2 Nicht-lymphatische Gewebe 10
2.1.4.2.1 Endothelzellen, interstitielle dendritische Zellen und lymphatische Zellen 10
2.1.4.2.2 Zentrales und peripheres Nervengewebe, Rückenmark 10
2.1.4.2.3 Gastrointestinaltrakt 11
2.1.4.2.4 Leber 12
2.1.4.2.5 Pankreas 12
2.1.4.2.6 Niere 13
2.1.4.2.7 Lunge 14
2.1.4.2.8 Weitere Gewebeproben 14
2.1.5 Regulierungsmechanismen der Expression der MHC Klasse II-Antigene 14
2.2 Der MHC der Katze 16
2.2.1 Genom und Polvmorphismus 16
2.2.2 Struktur der MHC Klasse II-Antigene 17
2.2.3 Expression der MHC Klasse II-Antigene bei domestizierten Katzen
(Feus syl vestris f. ca ras) 17
2.2.3.1 Feline Leukozyten und Zelllinien 17
2.2.3.2 Expression der MHC Klasse II-Antigene in feiinen Geweben 18
2.2.3.2.1 Lymphatische Gewebe 18
2.2.3.2.2 Nicht-lymphatische Gewebe 19
Inhaltsverzeichnis . _
23 Expression von MHC Klasse II-Antigenen im Zusammenhang mit
VERSCHIEDENEN VIRUSERKRANKUNGEN DER KATZE M
3 MATERIAL UND METHODEN i4-
3.1 Versuchstiere 24
3.1.1 Immunisierung 24
3.2 Herstellung monoklonaler Antikörper 24
3.2.1 Myelomzellunie und Kulturbedingungen 24
3.2.2 Fusion 26
3.2.3 Klonierung der Hybridomzellen 27
3.2.4 Einfrieren und Auftauen der Hybridomzellen 28
3.3 Untersuchungsmaterial 28
3.3.1 Zelllinien 28
3.3.2 Blutproben 30
3.3.3 Organproben 31
3.4 immunhistologische untersuchungen 33
3.4.1 Seren und Antikörper 33
3.4.1.1 Ratten-, Schweine- und Pferdeserum 33
3.4.1.2 Primärantikörper und Vergleichssysteme 33
3.4.1.3 Sekundärantikörper 34
3.4.2 Angewandte immunhistologische Methoden 35
3.4.2.1 Antigen-Retrieval 35
3.4.2.2 Indirekte Peroxidase-Methode 36
3.4.2.3 Peroxidase anti-Peroxidase- (PAP-) Methode 37
3.4.2.4 Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplex- (ABC-) Methode 38
3.4.2.5 Entfernung des Formalinpigments 39
3.4.3 Durchführung des Antigennachweises 39
3.4.3.1 Zelllinien 40
3.4.3.2 Blutzellen 40
3.4.3.2.1 Blutausstrich 40
3.4.3.2.2 Zytozentrifugenpräparate isolierter Blutleukozyten 41
3.4.3.3 Organproben 41
3.4.4 Auswertung der Immunreaktionen 42
3.5 Charakterisierung des monoklonalen Antikörpers F7 1 D4 F6 H4 42
3.5.1 Bestimmung des Molekulargewichts des durch den monoklonalen
Antikörper F7 1 D4 F6 H4 nachgewiesenen Antigens 42
3.5.1.1 SDS-Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese(SDS-Page) 42
3.5.1.2 Western Blot 43
3.5.1.3 Immunfärbung 44
Inhaltsverzeichnis 111
3.5.2 Bestimmung der Immunglobulinklasse und -Subklasse sowie des
Leichtkettentyps des monoklonalen Antikörpers F7 1 D4 F6 H4 45
3.5.3 Untersuchung im Durchflusszytometer 46
3.6 Produktion grober Mengen des monoklonalen Antikörpers
F7 1 D4 F6 H4 48
3.7 Nachweis der Stabilität des monoklonalen Antikörpers F7 1 D4 F6 H4
UND DER HYBRIDOMZELLEN SO
4 ERGEBNISSE §1
4.1 IMMUNHISTOLOGISCHER VERGLEICH DES MONOKLONALEN ANTIKÖRPERS
F7 1 D4 F6 H4 mit den Antikörpern gegen MHC II/HLA-DR, CD 3 und
CD 45R 51
4.2 Charakterisierung des monoklonalen Antikörpers F7 1 D4 F6 H4 54
4.2.1 Molekulargewicht des durch den monoklonalen Antikörper F7 1 D4 F6 H4
nachgewiesenen antigens 54
4.2.2 Immunglobulinklasse, -Subklasse und Leichtkettentyp 55
4.2.3 Durchflusszytometer 55
43 Immunhistologie 55
4.3.1 Methodenvergleich 55
4.3.2 Untersuchungen von Zelllinien und peripheren Blutzellen 56
4.3.2.1 Zelllinien 56
4.3.2.2 Blutproben 57
4.3.3 Organe 58
4.3.3.1 Domestizierte Katzen (Felis sylvestris f. catus) 58
4.3.3.1.1 SPF-Katzen 58
4.3.3.1.2 FeLV-negative und -positive Katzen 61
4.3.3.1.2.1 FeLV-negative Katzen ohne neurologische Symptome 61
4.3.3.1.2.2 FeLV-positive Katzen ohne neurologische Symptome 63
4.3.3.1.2.3 FeLV-negative Katzen mit neurologischen Symptomen 64
4.3.3.1.2.4 FeLV-positive Katzen mit neurologischen Symptomen 66
4.3.3.1.3 FIP-Katzen 67
4.3.3.1.4 FlV-positive Katzen 70
¦ 4.3.3.1.5 Formalin-fixierte, Paraffin-eingebettete Hautproben sowie Methanol-fixierte,
Paraffin-eingebettete Organe je einer Katze 71
4.3.3.2 Wildfeliden 71
4.3.3.3 Andere Haustiere und Labornager 73
4.3.3.4 Mensch 74
Inhaltsverzeichnis . *
4.4 Stabilität der Hybridomzellen sowie des monoklonalen Antikörpers
F7 1 D4 F6 H4 74
5 DISKUSSION . 26
5.1 Herstellung des monoklonalen Antikörpers gegen felines MHC Klasse
ii-antigen
5.2 Eigenschaften des hergestellten monoklonalen Antikörpers 77
53 Reaktionsmuster des monoklonalen Antikörpers F71 D4 F6 H4 sowie
anderer monoklonaler antikörper gegen mhc klasse ii-antigene der
Katze «1
5.3.1 Feline Leukozyten und Zelllinien 81
5.3.2 Organe 83
5.3.2.1 Reaktionsmuster des monoklonalen Antikörpers F7 1 D4 F6 H4 83
5.3.2.2 Reaktionsmuster anderer monoklonaler Antikörper im Vergleich 87
6 ZUSAMMENFASSUNG _21
SUMMARY 93
7 LITERATURVERZEICHNIS 95
8 ANHANG 118
8.1 Tabellen 118
8.2 Abbildungen 161
8.3 Bezugsquellen 196
8.3.1 Bezugsquellen für Chemikalien und Antikörper 196
8.3.2 Bezugsquellen für Geräte und Einmalartikel 200
8.4 lösungen und puffer 203
8.4.1 SDS-Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese 203
8.4.2 Western Blot 205
8.4.3 Immunfärbung 205
8.4.4 durchflusszytometer 206
8.4.5 Immunhistologie 206
8.4.6 Weitere Lösungen 208
8.5 Abkürzungsverzeichnis 209
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