Genotypische Charakterisierung von porcinen Pasteurella multocida aus dem Atmungstrakt von klinisch gesunden und erkrankten Schweinen:
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Berlin
Mensch und Buch Verl.
2010 [erschienen] 2011
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VERZEICHNIS VERWENDETER ABKUERZUNGEN IV
1. EINLEITUNG 1
2. LITERATURUEBERSICHT 2
2.1. PASTEURELLA MULTOCIDA 2
2.1.1. ERSTBESCHREIBUNG DES ERREGERS DURCH LOUIS PASTEUR 2
2.1.2. TAXONOMIE VON P. MULTOCIDA 2
2.1.3. METHODEN ZUR ISOLIERUNG, IDENTIFIZIERUNG UND TYPISIERUNG VON P.
MULTOCIDA- ISOLATEN 4
2.1.3.1. ISOLIERUNG VON P. MULTOCIDA AUS PROBENMATERIAL UND
PHAENOTYPISCHE IDENTIFIZIERUNG VON P. MULTOCIDA 4
2.1.3.1.2 PHAENOTYPISCHE IDENTIFIZIERUNG 5
2.1.3.2. SEROLOGISCHE UND ANTIKOERPER-BASIERTE IDENTIFIZIERUNG UND
TYPISIERUNG VON P. MU/FOC/DA-LSOLATEN 6
2.1.3.2.1 SEROLOGISCHE IDENTIFIZIERUNG UND TYPISIERUNG VON P.
MULTOCIDA- SO ATEN....6 2.1.3.2.2 ANTIKOERPER-BASIERTE IDENTIFIZIERUNG
VON P. MULTOCIDA 7
2.1.3.3. BESTIMMUNG DER KAPSELTYPEN BEI P. MU/TOC/DA-LSOLATEN 8
2.1.3.4. BANDENBASIERTE METHODEN ZUR CHARAKTERISIERUNG VON P. MULTOCIDA
10 2.1.3.4.1 CHARAKTERISIERUNG VON P. MULTOCIDA AUF DER BASIS VON
AEUSSEREN MEMBRAN PROTEIN-PROFILEN 10
2.1.3.4.2 IDENTIFIZIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON P. MULTOCIDA MIT
HILFE DER POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 11
2.1.3.4.3 RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN-ANALYSE (REA) 17
2.1.3.4.4 RIBOTYPISIERUNG 18
2.1.3.4.5 PULSFELD-GELELEKTROPHORESE 19
2.1.3.4.6 RANDOMLY AMPLIFIED POLYMORPHIC DNA (RAPD) 19
2.1.3.4.7 AMPLIFIED FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM (AFLP) 20
2.1.3.5. SEQUENZANALYSEN-BASIERTE METHODEN ZUR CHARAKTERISIERUNG VON P.
MULTOCIDA- ISOLATEN 20
2.1.4. PASTEURELLA MULTOCIDA ALS KRANKHEITSERREGER 21
2.1.4.1. PASTEURELLOSEN DER SCHWEINE 23
2.1.4.1.1 PROGRESSIVE ATROPHISCHE RHINITIS (PAR) 23
2.1.4.1.2 PAS(EURE//A-PNEUMONIE DER SCHWEINE 24
2.1.5. VIRULENZASSOZIIERTE FAKTOREN UND DEREN BEDEUTUNG BEI DER
IMPFSTOFFFORSCHUNG 25 2.1.5.1. GANZZELLVAKZINEN (TOTIMPFSTOFFE;
ATTENUIERTE LEBENDIMPFSTOFFE) 27 2.1.5.2. IMMUNOGENE WIRKUNG EINZELNER
P. MU/TOC/DA-ANTIGENE 29
2.1.5.2.1 ADHAESIONSFAKTOREN 29
2.1.5.2.2 KAPSELTYPEN 32
2.1.5.2.3 LIPOPOLYSACCHARID (LPS) 34
2.1.5.2.4 AEUSSERE MEMBRAN PROTEINE (OMP) 36
2.1.5.2.5 EISENAKQUIRIERUNGSSYSTEME 38
2.1.5.2.6 P. MULTOCIDA DERMONEKROTOXIN; DNT [TOXA) 41
2.1.5.2.7 NEURAMINIDASEN 43
2.1.5.2.8 LIPOPROTEINE 44
2.1.5.2.9 AROA 45
3. MATERIAL UND METHODEN 48
3.1. BAKTERIENSTAEMME 48
3.1.1. P. MU/FOC/DA-WILDTYPISOLATE 48
I
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/1013485440
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
3.1.2. KONTROLL-UND REFERENZSTAEMME 49
3.2. BAKTERIOLOGISCHE UNTERSUCHUNG VON ORGANPROBEN UND IDENTIFIZIERUNG
VON P. MULTOCIDA 50
3.3. ASSERVIERUNG DER BAKTERIENSTAEMME UND ANZUCHT FUER EXPERIMENTELLE
UNTERSUCHUNGEN 50
3.4. MOLEKULARGENETISCHE METHODEN ZUR CHARAKTERISIERUNG DER P.
MU/TOC/DA-LSOLATE ....50 3.4.1. GEWINNUNG GENOMISCHER DNS 50
3.4.1.1. HITZELYSE 50
3.4.1.2. AUFREINIGUNG GENOMISCHER DNS 51
3.4.1.3. EXTRAKTION VON PCR-PRODUKTEN AUS AGAROSEGEL 51
3.4.1.4. AUFREINIGUNG DER PCR-PRODUKTE 51
3.4.2. KONZENTRATIONSBESTIMMUNG ISOLIERTER DNS 52
3.5. POLYMERASE-KETTENREAKTION 52
3.5.1. OLIGONUKLEOTIDPRIMER 52
3.5.2. REAKTIONSANSAETZE UND THERMOCYCLER-PROGRAMME FUER DIE
MULTIPLEX-PCR- UNTERSUCHUNGEN 55
3.5.3. REAKTIONSANSAETZE UND THERMOCYCLER-PROGRAMME FUER EINZEL-PCREN 56
3.5.4. REAKTIONSANSAETZE UND THERMOCYCLER-PROGRAMME FUER DIE
UNTERSUCHUNGEN DER FUER DAS PASTEURELLA FILAMENTOESE HAEMAGGLUTININ UND DAS
IMMUNGLOBULIN-BINDENDE PROTEIN KODIERENDEN GENSEQUENZEN PFHAB UND IGBP
56
3.6. DNS-DNS-HYBRIDISIERUNG 60
3.6.1. DOT-BLOT-HYBRIDISIERUNG 60
3.6.2. RESTRIKTIONSENDONUKLEASE-VERDAU 60
3.6.3. SOUTHERN BLOT (KAPILLARBLOT) 60
3.6.4. 16SRRNA-RIBOTYPISIERUNG 61
3.6.5. ENTWICKLUNG DES BELICHTETEN ROENTGENFILMES 62
3.6.6. AUFREINIGEN DER MEMBRAN 62
3.6.7. AUSWERTUNG DER 16 S RRNA-RIBOTYPISIERUNG 63
3.7. MULTILOKUS SEQUENZTYPISIERUNG (MLST) 63
3.7.1. DARSTELLUNG DER MLST-DATEN IN MINUMUM-SPANNING-TREE (MSTREE) 64
3.8. STATISTISCHE AUSWERTUNG 64
4. ERGEBNISSE 68
4.1. ERGEBNISSE DER MULTIPLEX-PCR-UNTERSUCHUNGEN 68
4.1.1. GENOTYPISCHE IDENTIFIZIERUNG VON P. MULTOCIDA 68
4.1.2. NACHWEIS VIRULENZASSOZIIERTER GENE 68
4.1.2.1. NACHWEIS VON KAPSELTYPEN, VORKOMMEN IN ISOLATEN DES OBEREN UND
UNTEREN RT SOWIE IN ABHAENGIGKEIT ZU ANAMNESTISCHEN INFORMATIONEN 68
4.1.2.2. NACHWEIS VIRULENZASSOZIIERTER GENE, VERTEILUNG IM OBEREN UND
UNTEREN RT SOWIE IN ABHAENGIGKEIT ZU ANAMNESTISCHEN INFORMATIONEN 71
4.1.3. PASTEURELLA FILAMENTOESES HAEMAGGLUTININ (PFHAB) 73
4.2. 16S RRNA-HYBRIDISIERUNG (RIBOTYPISIERUNG) 75
4.2.1. BEZIEHUNGEN ZWISCHEN RIBOTYPEN, VAG, KAPSELTYPEN UND VERFUEGBAREN
ANAMNESTISCHEN INFORMATIONEN (GEOGRAPHISCHE HERKUNFT, KRANKHEITSSTATUS,
ANATOMISCHE HERKUNFT) 78
4.3. MULTILOKUS SEQUENZTYPISIERUNG (MLST) 79
II
IMAGE 3
5. DISKUSSION 85
5.1. DIE AUFTRETENDEN VAG-MUSTER ZEIGEN EINE GERINGE VARIABILITAET
INNERHALB DER DERZEIT IN DEUTSCHEN SCHWEINEBESTAENDEN VORKOMMENDEN P.
MULTOCIDA 85
5.2. DIE MEHRHEIT DER UNTERSUCHTEN PORCINEN P. MULTOCIDA GRUPPIEREN SICH
IN NUR DREI 16S RRNA-RIBOTYPMUSTEM 91
5.3. ERSTE MLST-UNTERSUCHUNGEN BESTAETIGEN EINE GERINGE GENETISCHE
VARIABILITAET..93
5.4. IMMUNOGENE WIRKUNG 97
6. ZUSAMMENFASSUNG 99
7. LITERATURVERZEICHNIS 103
8. ANHANG 120
8.1. NAEHRMEDIEN 120
8.1.1. FLUESSIGE NAEHRMEDIEN 120
8.1.2. FESTE NAEHRMEDIEN 120
8.2. REAGENZIEN 120
8.3. LOESUNGEN, PUFFER UND ENZYME 121
8.3.1. PUFFER, LOESUNGEN UND ENZYME FUER DIE POLYMERASE-KETTENREAKTION 121
8.3.2. PUFFERUND LOESUNGEN FUER DIE HORIZONTALE AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE
121 8.3.3. PUFFER UND LOESUNGEN FUER SOUTHERN BLOT UND
DNS-DNS-HYBRIDISIERUNG 122
8.4. BENOETIGTE MATERIALIEN ZUM AUFBAU EINES SOUTHERN BLOT (KAPILLARBLOT)
123
8.5. PROTOKOLL ZUR 16S RRNA-RIBOTYPISIERUNG 124
8.6. BEZUGSQUELLEN VON GERAETEN, VERBRAUCHSMATERIALIEN UND CHEMIKALIEN
125
8.7. TABELLARISCHE DARSTELLUNG ALLER UNTERSUCHTER ISOLATE,
VORBERICHTLICHER INFORMATIONEN SOWIE DER ERGEBNISSE DER DURCHGEFUEHRTEN
PCR-UNTERSUCHUNGEN, RIBOTYPISIERUNG UND MLST 127
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| spelling | Bethe, Astrid Verfasser aut Genotypische Charakterisierung von porcinen Pasteurella multocida aus dem Atmungstrakt von klinisch gesunden und erkrankten Schweinen vorgelegt von Astrid Bethe Genotypic characterization of porcine Pasteurella multocida from the respiratory tract of healthy and diseased swine Berlin Mensch und Buch Verl. 2010 [erschienen] 2011 VI, 141 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Nebentitel: Genotypic characterization of porcine Pasteurella multocida from the respiratory tract of healthy and diseased swine Berlin, Freie Univ., Diss., 2011 Pasteurella multocida cabt respiratory diseases cabt pigs cabt polymerase chain reaction cabt ribotyping cabt multilocus sequence typing cabt Schwein (DE-588)4053848-5 gnd rswk-swf Pasteurella multocida (DE-588)4415806-3 gnd rswk-swf Atemwege (DE-588)4068903-7 gnd rswk-swf Genotyp (DE-588)4601328-3 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Schwein (DE-588)4053848-5 s Atemwege (DE-588)4068903-7 s Pasteurella multocida (DE-588)4415806-3 s Genotyp (DE-588)4601328-3 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000023717-6 http://www.diss.fu-berlin.de/diss/receive/FUDISS_thesis_000000023717 kostenfrei Volltext DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=024184056&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
| spellingShingle | Bethe, Astrid Genotypische Charakterisierung von porcinen Pasteurella multocida aus dem Atmungstrakt von klinisch gesunden und erkrankten Schweinen Pasteurella multocida cabt respiratory diseases cabt pigs cabt polymerase chain reaction cabt ribotyping cabt multilocus sequence typing cabt Schwein (DE-588)4053848-5 gnd Pasteurella multocida (DE-588)4415806-3 gnd Atemwege (DE-588)4068903-7 gnd Genotyp (DE-588)4601328-3 gnd |
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