Rolle der Cdx-Gene in der embryonalen Kardiogenese:
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2012
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
1 E I N L E I T U N G 1
1.1 MOTIVATION UND ZIELSETZUNG I
1.2 THEORETISCHER HINTERGRUND 3
1.2.1 STAMMZELLEN: DEFINITION UND HINTERGRUND 3
1.2.2 ADULTE STAMMZELLEN UND THERAPIEMOEGLICHKEITEN 4
1.2.2.1 DIE HAEMATOPOETISCHE STAMMZELLTRANSPLANTATION 4
1.2.2.2 STAMMZELLTRANSPLANTATION ALS THERAPIEANSATZ BEI
MYOKARDSCHAEDIGUNG 7 1.2.3 PLURIPOTENTE STAMMZELLEN ALS NEUE OPTION IN
DER REGENERATIVEN MEDIZIN 9 1.2.3.1 EMBRYONALE STAMMZELLEN: DEFINITION,
HERSTELLUNG UND KULTIVIERUNG 9 1.2.3.2 EMBRYONALE STAMMZELLFORSCHUNG:
RECHTSLAGE UND ETHISCHE ASPEKTE 12
1.2.3.3 BEDEUTUNG PLURIPOTENTER STAMMZELLEN FUER DIE MEDIZIN UND BIOLOGIE
14 1.2.3.4 MESODERMALE DIFFERENZIERUNG PLURIPOTENTER STAMMZELLEN 16
1.2.3.5 DER CDX-HOX SIGNALWEG 19
2 M A T E R I A L U N D M E T H O D E N 23
2.1 MATERIAL 23
2.1.1 ZELLLINIEN 23
2.1.1.1 MURINE EMBRYONALE FIBROBLASTEN (MEF) 23
3.1.1.2 EMBRYONALE STAMMZELLEN DER MAUS (MURINE ES-ZELLEN) 23
2.1.2 MEDIEN 23
3.1.2.1 MEF MEDIUM (MEDIUM FUER EMBRYONALE FIBROBLASTEN DER MAUS) 23
3.1.2.2 MEDIUM FUER EMBRYONALE STAMMZELLEN DER MAUS (ES-ZELLEN MEDIUM) 24
3.1.2.3 EB-MEDIUM (DIFFERENZIERUNGS-MEDIUM FUER EMBRYOID-BODIES DER MAUS)
25 3.1.2.4 GEFRIERMEDIUM 25
2.1.3 KITS 26
2.1.4 PCR-PRIMER 26
2.1.5 GERAETE 27
2.1.6 VERBRAUCHSMATERIALIEN 28
2.1.7 PROGRAMME 28
2.2 METHODEN 29
2.2.1 MURINE ES-ZELLEN KULTIVIEREN 29
2.2.1.1 KULTIVIERUNG VON MURINEN EMBRYONALEN FIBROBLASTEN 29
2.2.1.2 AUFTAUEN DER MURINEN ES-ZELLEN 29
2.2.1.3 KULTIVIERUNG VON MURINEN ES-ZELLEN 30
2.2.1.4 PASSAGIEREN DER MURINEN ES-ZELLEN 30
2.2.1.5 EINFRIEREN DER ES-ZELLEN 30
2.2.2 VERSUCHSAUFBAU: EB-MODELL 3 1
2.2.2.1 ANSATZ VON EMBRYOID BODIES (EBS) ALS HANGING DROPS 3 1
2.2.2.2 ERNTEN DER EMBRYOID BODIES 32
2.2.3 FUNKTIONELLE BEATING -UNTERSUCHUNGEN 33
2.2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 34
2.2.3.1 PROBENENTNAHME FUER RT-PCR 34
2.2.3.2 RNA-ISOLIERUNG 34
2.2.3.3 RNA-QUANTIFIZIERUNG 35
2.2.3.4 CDNA-SYNTHESE (REVERSE TRANSKRIPTION) 36
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IMAGE 2
2.2.3.5 REAL-TIME PCR 37
3 E R G E B N I S S E 38
3.1 DIFFERENZIERUNG VON ES-ZELLEN IN EMBRYOID BODIES 38
3.2. FRUEHE MESODERMALE UND KARDIALE DIFFERENZIERUNG VON ES-ZELLEN IN
EMBRYOID BODIES 4 0
3.2 NACHWEIS ENDOGEN UND EKTOPISCH AKTIVIERTER EXPRESSION VON CDX1 UND
CDX4 IN DIFFERENZIERENDEN ES-ZELLEN DER MAUS ANHAND DES EMBRYOID BODY
MODELLS 4 1
3.3. AKTIVIERUNG VON CDX1 UND C D X 4 FUEHRT ZU EINER UNTERDRUECKUNG DES
DURCH KONTRAHIERENDE KARDIOMYOZYTEN SICHTBAREN BEATING IM EMBRYOIDBODY
43 3.4 DIE EXPRESSION KARDIALER GENE WIE MESP1 , NKX2.5, GATA4 UND ISL1
WIRD DURCH
DIE AKTIVIERUNG VON CDX1 UND C D X 4 UNTERDRUECKT 4 5
3.5 UNTERSUCHUNG DER KARDIOGENEN DIFFERENZIERUNG IN CDX1-I- ES-ZELLEN 4
7
4 D I S K U S S I O N 4 9
5 Z U S A M M E N F A S S U N G 56
6 D A R S T E L L U N G S V E R Z E I C H N I S 57
6.1 ABBILDUNGEN 57
6.2 TABELLEN 59
7 L I T E R A T U R V E R Z E I C H N I S 60
8 D A N K S A G U N G 68
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