Analyse des Peptidprofils von Milch und Milchprodukten zur Identifizierung bioaktiver Komponenten:
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS V
ABBILDUNGSVERZEICHNIS VII
TABELLENVERZEICHNIS IX
1 EINLEITUNG 1
1.1 BIOAKTIVE MILCHPEPTIDE 1
1.2 MILCH UND KEFIR 5
1.2.1 MILCH 5
1.2.2 KEFIR 6
1.3 MASSENSPEKTROMETRISCHE METHODEN ZUR PEPTIDANALYTIK 9
1.4 ZIELSETZUNG DIESER ARBEIT 13
2 ANALYSE DES PEPTIDPROFILS VON MILCH ZUR IDENTIFIZIERUNG BIOAKTIVER
PEPTIDE 15 2.1 EINLEITUNG 15
2.2 VERMESSUNG MITTELS MALDI-TOF NACH C 18-ZIPTIP MIKROEXTRAKTION 16
2.3 FRAKTIONIERUNG VON MILCHPEPTIDEN MITTELS HPLC 19
2.4 FRAKTIONIERUNG VON MILCHPEPTIDEN MITTELS OFFGEL FRACTIONATOR* ....
23
2.5 DISKUSSION 25
3 VERGLEICHENDE PEPTIDPROFILANALYSE VON MILCH VERSCHIEDENER
ERHITZUNGSSTU FEN 37
3.1 EINLEITUNG 37
3.2 ENTWICKLUNG EINER HOCHDURCHSATZFAHIGEN C 18-EXTRAKTIONSMETHODE ...
38 3.2.1 MIKROEXTRAKTION MIT STAGETIPS 39
3.2.2 AUTOMATISIERTE MALDI-TOF MESSMETHODE ZUR PEPTIDPROFILANALYSE 41
3.3 ERGEBNISSE DER RELATIVEN QUANTIFIZIERUNG 42
3.4 DISKUSSION 48
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IMAGE 2
4 PHOSPHOPEPTIDANALYSE IN MILCH 55
4.1 EINLEITUNG 55
4.2 SELEKTIVE DETEKTION VON PHOSPHOPEPTIDEN MIT 4-CHLOR-A-CYANOZIMTSAEURE
57
4.3 DEPHOSPHORYLIERUNG VON MILCHPEPTIDEN 59
4.4 DISKUSSION 60
5 ANALYSE DES PEPTIDPROFILS VON KEFIR ZUR IDENTIFIZIERUNG BIOAKTIVER
PEPTIDE 67 5.1 EINLEITUNG 67
5.2 ENTWICKLUNG EINER METHODE ZUR ANALYSE DES PEPTIDPROFILS VON KEFIR .
. 68 5.3 EINFLUSS VON STARTERKULTUR. TEMPERATUR UND PH-WERT AUF DAS
PEPTIDPROFIL VON KEFIR _ 71
5.4 VERAENDERUNG DES PEPTIDPROFILS VON KEFIR WAEHREND DER LAGERUNG BEI 4
C 73 5.5 PEPTIDPROFIL VON KEFIR AUS ZIEGENMILCH 75
5.6 ISOLIERUNG DER PEPTIDE AUS KEFIR MITTELS
GROESSENAUSSCHLUSSCHROMATOGRAPHIE 78 5.7 PEPTIDPROFIL VON KEFIR NACH
SIMULIERTEM GASTROINTESTINALEN VERDAU ... 81 5.8 IDENTIFIKATION DER
KEFIRPEPTIDE MIT UHPLC-ESI QTRAP MASSENSPEKTROMETRIE 84
5.9 DISKUSSION 87
6 MATERIAL UND METHODEN 97
6.1 GERAETE 97
6.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 99
6.3 CHEMIKALIEN 99
6.4 KOMMERZIELLE KITS 101
6.5 LOESUNGEN UND PUFFER 101
6.6 METHODEN ZUR ANALYSE DES PEPTIDPROFILS VON MILCH MITTELS
MASSENSPEKTROMETRIE 105
6.6.1 HERKUNFT DER MILCHPROBEN 105
6.6.2 VERMESSUNG DER MILCHPEPTIDE MIT MALDI-TOF MS NACH C18ZIPTIP
MIKROEXTRAKTION 105
6.6.3 VERMESSUNG MITTELS MALDI-TOF MS NACH HPLC-FRAKTIONIERUNG 106 6.6.4
FRAKTIONIERUNG MITTELS OFFGEL FRACTIONATOR* 106
6.6.5 MALDI-TOF/TOF MASSENSPEKTROMETRIE 107
6.6.6 LTQ ORBITRAP XL MASSENSPEKTROMETRIE GEKOPPELT MIT UPLC . 108
6.6.7 SUCHE IN DER SWISSPROT DATENBANK MIT MASCOT UND SEQUEST 109
IMAGE 3
6.7 METHODEN ZUR VERGLEICHENDEN PEPCIDPROSSLANALYSE IN MILCH MIT MALDI-
TOF MS 110
6.7.1 HERKUNFT DER MILCHPROBEN 110
6.7.2 VERMESSUNG DER PEPTIDE AUS MILCH MIT MALDI-TOF MS NACH
STAGETIP MIKROEXTRAKTION 110
6.7.3 ZUGABE VON ANGIOTENSIN I ZUR RELATIVEN QUANTIFIZIERUNG VON
MILCHPEPTIDEN 111
6.8 METHODEN ZUR ANALYSE VON PHOSPHOPEPTIDEN IN MILCH MITTELS
MASSENSPEKTROMETRIE 112
6.8.1 HERKUNFT DER MILCHPROBEN 112
6.8.2 VERMESSUNG DER MILCHPEPTIDE MIT MALDI-TOF MS NACH C18
ZIPTIP MIKROEXTRAKTION 112
6.8.3 VERMESSUNG DER MILCHPEPTIDE MIT UHPLC-ESI QTRAP MS UND
MS/MS 112
6.8.4 DEPHOSPHORYLIERUNG VON MILCHPEPTIDEN 113
6.8.5 MASCOT SUCHE BEI SWISSPROT 114
6.9 METHODEN ZUR ANALYSE DES PEPTIDPROFILS VON KEFIR 114
6.9.1 HERKUNFT UND HERSTELLUNG DES KEFIRS 114
6.9.2 EXTRAKTION UND VERMESSUNG DER PEPTIDE AUS KEFIR MIT STAGETIPS UND
MALDI-TOF MS 115
6.9.3 SIMULIERTER GASTROINTESTINALER VERDAU VON KEFIR 115
6.9.4 GELFILTRATIONSCHROMATOGRAPHIE VON KEFIRPEPTIDEN 116
6.9.5 EXTRAKTION UND IDENTIFIZIERUNG DER PEPTIDE AUS KEFIR MIT STA
GETIPS UND UHPLC-ESI QTRAP MS/MS UND ANSCHLIESSENDER MASCOT-SUCHE BEI
SWISSPROT 116
7 ZUSAMMENFASSUNG 119
8 SUMMARY 125
LITERATURVERZEICHNIS 131
9 ANHANG 147
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