Untersuchungen zur synergistischen Zytotoxizität zwischen Saponinen und Ribosomen inaktivierenden Proteinen Typ I:
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2013
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
ABKURZUNGSVERZEICHNIS V
1 EINLEITUNG 1
1.1 SAPONINE 1
1.1.1 SAPONINE DER CARYOPHYLLACEAE 4
1.1.1.1 AGROSTEMMA GITHAGO L. (CARYOPHY 1 LACEAE) 7
1.1.1.2 SAPONINUM ALBUM 9
1.2 SYNERGISTISCHE ZYTOTOXIZITAT 10
1.3 RIBOSOMEN INAKTIVIERENDE PROTEINE (RIP) 11
1.4 ZIELSETZUNG 14
2 MATERIALIEN UND METHODEN 15
2.1 GERATE 15
2.1.1 PFLANZENEXTRAKTION 15
2.1.2 STOFFISOLATION UND STRUKTURAUFKLARUNG 15
2.1.2.1 HPLC 15
2.1.2.2 HPLC-ESI-TOF-MS UND ESI-TOF-MS 15
2.1.2.3 NMR 15
2.1.3 ZELLKULTUR 16
2.1.4 ZYTO-UND MEMBRANTOXIZITATSUNTERSUCHUNGEN 16
2.1.5 OBERFLACHENSPANNUNGSMESSUNGEN 16
2.1.6 RADIOANALYTISCHE UNTERSUCHUNGEN 16
2.1.7 SONSTIGE GERATE, WAAGEN UND ZENTRIFUGEN 16
2.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN 17
2.3 ZELLLINIEN 18
2.3.1 NIH-3T3/HER14 18
2.3.2 ECV-304 18
2.4 CHEMIKALIEN, MEDIEN UND PUFFER 19
2.4.1 PFLANZENEXTRAKTION, STOFFISOLATION UND STRUKTURAUFKLARUNG 19
2.4.2 ZELLKULTUR 19
2.4.3 ZYTO-UND MEMBRANTOXIZITATSUNTERSUCHUNGEN 19
2.4.4 RADIOANALYTISCHE UNTERSUCHUNGEN 20
2.5 UNTERSUCHTE SAPONINE 21
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INHALTSVERZEICHNIS
II
2.6 UNTERSUCHTE PFLANZEN, DROGEN UND SAPONINUM ALBUM 22
2.6.1 GYPSOPHILA OLDHAMIANA MLQ. (CARYOPHYLLACEAE) 22
2.6.2 GYPSOPHILA PACIFICA KOM. (CARYOPHYLLACEAE) 23
2.6.3 GYPSOPHILA ARROSTII GUSS. (CARYOPHYLLACEAE) 24
2.6.4 AGROSTEMMA GITHAGO L. (CARYOPHYLLACEAE) 25
2.6.5 SAPONARIA OFFICINALIS L. (CARYOPHYLLACEAE) 26
2.6.6 SILENE VULGARIS (MOENCH) GARCKE (CARYOPHYLLACEAE) 26
2.6.7 VACCARIA HISPANICA (MILL.) RAUSCHERT (CARYOPHYLLACEAE) 27
2.6.8 SAPONINUM ALBUM 27
2.7 PHYTOCHEMISCHE METHODEN DER EXTRAKTION, ISOLATION UND
STRUKTURAUFKLARUNG 28
2.7.1 EXTRAKTION 28
2.7.2 ISOLATION 28
2.7.3 STRUKTURAUFKLARUNG 29
2.8 ZELL- UND MEMBRANBIOLOGISCHE METHODEN 30
2.8.1 KULTIVIERUNG DER ZELLEN 30
2.8.1.1 UNTERSUCHUNGEN ZUR ZYTOTOXIZITAT VON SAPORIN AN ECV-304-ZELLEN
30
2.8.1.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR ZYTOTOXIZITAT VON SAPONINUM ALBUM AN ECV-304-
ZELLEN 31
2.8.1.3 UNTERSUCHUNGEN ZUR ZYTOTOXIZITAT VON AUSGEWAHLTEN SAPONINEN UND
EXTRAKTEN AN ECV-304-ZELLEN 31
2.8.1.4 UNTERSUCHUNGEN ZUR ZYTOTOXIZITAT VON SAPONINEN AUS AGROSTEMMA
GITHAGO
L. AN ECV-304-ZELLEN 32
2.8.1.5 UNTERSUCHUNGEN ZUR ZYTOTOXIZITAT VON SAPORIN-EGF AN
NIH-3T3/HER14-
ZELLEN 32
2.8.2 MTT-ASSAY 33
2.8.3 DNA-QUANTIFIZIERUNG 35
2.8.4 UNTERSUCHUNGEN ZUR MEMBRANTOXIZITAT / LDH-ASSAY 36
2.9 OBERFLACHENSPANNUNGSMESSUNGEN 38
2.10 RADIOANALYTISCHE METHODEN 39
2.10.1 GEKUHLTE KONZENTRATIONSABHANGIGE
3
H-CHOLESTEROLAUFNAHME 39
2.10.2 UNGEKIIHLTE KOMPETITIVE, KONZENTRATIONSABHANGIGE
3
H-CHOLESTEROLAUFNAHME 40
2.10.3 ZEITABHANGIGE
3
H-CHOLESTEROLAUFNAHME 40
2.10.4 BEEINFLUSSUNG DER
3
H-CHOLESTEROLAUFNAHME DURCH SAPONINE 41
2.10.5 BEEINFLUSSUNG DER
3
H-CHOLESTEROLFREISETZUNG DURCH SAPONINE 41
2.10.6 BEEINFLUSSUNG DES ENDOSOMALEN
3
H-CHOLESTEROLGEHALTS DURCH SA1641 42
2.11 STATISTISCHE METHODEN 43
INHALTSVERZEICHNIS
III
3 ERGEBNISSE 44
3.1 SAPONINISOLATION AUS PFLANZEN, DROGEN UND SAPONINUM ALBUM 44
3.1.1 UNTERSUCHUNG VON EXTRAKTEN AUS PFLANZEN UND DROGEN 44
3.1.2 SAPONINISOLATION AUS SAPONINUM ALBUM 49
3.1.3 SAPONINISOLATION AUS AGROSEMMA GITHAGO L. 53
3.2 ZELLBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN ZUR ZYTOTOXIZITAT UND ZUR
SYNERGISTISCHEN
ZYTOTOXIZITATSVERSTARKUNG 62
3.2.1 ZYTOTOXIZITAT VON SAPORIN AUF ECV-304-ZELLEN 63
3.2.2 ZYTOTOXIZITAT VON SAPONINUM ALBUM AUF ECV-304-ZELLEN 64
3.2.3 ZYTOTOXIZITAT AUSGEWAHLTER SAPONINE UND EXTRAKTE AUF
ECV-304-ZELLEN 65
3.2.4 ZYTOTOXIZITAT ISOLIERTER SAPONINE AUS AGROSTEMMA GITHAGO L. AUF
ECV 304-ZELLEN 75
3.2.5 ZYTOTOXIZITAT VON SAPORIN-EGF AUF NIH-3T3/HER14-ZELLEN 76
3.3 MEMBRAN-UND OBERFLACHENSPANNUNGSUNTERSUCHUNGEN 77
3.4 RADIOANALYTISCHE UNTERSUCHUNGEN 79
3.4.1 GEKUHLTE KONZENTRATIONSABHANGIGE
3
H-CHOLESTEROLAUFNAHME 79
3.4.2 UNGEKUHLTE KOMPETITIVE KONZENTRATIONSABHANGIGE
3
H-CHOLESTEROLAUFNAHME 79
3.4.3 ZEITABHANGIGE
3
H-CHOLESTEROLAUFNAHME 80
3.4.4 BEEINFLUSSUNG DER
3
H-CHOLESTEROLAUFNAHME UND-FREISETZUNG DURCH SAPONINE 82
3.4.5 BEEINFLUSSUNG DES ENDOSOMALEN
3
H-CHOLESTEROLGEHALTS DURCH SA1641 85
4 DISKUSSION 87
4.1 SUCHE NACH GEEIGNETEN SAPONINEN 87
4.2 VALIDIERUNG EINES TESTSYSTEMS ZUR TESTUNG VON SAPONINEN AUF
(SYNERGISTISCHE)
ZYTOTOXIZITATSVERSTARKUNG 91
4.3 TESTUNG VON SAPONINEN AUF SYNERGISTISCHE ZYTOTOXIZITATSVERSTARKUNG
VON RIP-I 95
4.3.1 OLEANOLSAURE ALS AGLYKON 98
4.3.2 HYDROXYOLEANOLSAUREDERIVATE ALS AGLYKON 98
4.3.3 ANDERE DERIVATE DER OLEANOLSAURE ALS AGLYKON 99
4.3.4 GYPSOGENIN ALS AGLYKON 99
4.3.5 HYDROXYGYPSOGENINDERIVATE ALS AGLYKON 101
4.3.6 SONSTIGE SAPONINE 103
4.3.7 SCHLUSSFOLGERUNGEN AUS DEN ZYTOTOXIZITATSUNTERSUCHUNGEN DER
SAPONINE 104
4.4 UNTERSUCHUNG DER SYNERGISTISCHEN ZYTOTOXIZITATSVERSTARKUNG EINES
RIP-I/LIGAND-
PROTEINKONJUGATS AN LIGANDENREZEPTOR-POSITIVEN ZELLEN 106
4.5 UNTERSUCHUNGEN ZUR OBERFLACHENAKTIVITAT VON AUSGEWAHLTEN SAPONINEN
107
4.6 UNTERSUCHUNGEN ZUR BEEINFLUSSUNG DES MEMBRANCHOLESTEROLS 113
4.6.1 ENTWICKLUNG EINES ZELLBASIERTEN MODELLS ZUR UNTERSUCHUNG DER
BEEINFLUSSUNG DES
MEMBRANCHOLESTEROLS DURCH SAPONINE 114
INHALTSVERZEICHNIS IV
4.6.2 UNTERSUCHUNG DER SAPONIN ABHANGIGEN
3
H-CHOLESTEROLFREISETZUNG UND DER
SAPONIN ABHANGIGEN STORUNG DER
3
H-CHOLESTEROLAUFNAHME 115
4.6.3 UNTERSUCHUNGEN ZUR BEEINFLUSSUNG DES CHOLESTEROLGEHALTS
ENDOSOMALER
MEMBRANEN 117
5 ZUSAMMENFASSUNG / SUMMARY 120
LITERATURVERZEICHNIS 123
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 132
TABELLENVERZEICHNIS 135
PUBLIKATIONSVERZEICHNIS 136
DANKSAGUNG 138
LEBENSLAUF 139
EIDESSTATTLICHE ERKLARUNG 140
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