Die Modulation der zellvermittelten Immunantwort durch EBI3 während der experimentellen Tuberkulose und Chagas Krankheit:
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2013
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS .VII
TABELLENVERZEICHNIS X
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS XI
1 EINLEITUNG 1
1.1 * SCHUTZ UND SCHADEN
DURCH DIE INFEKTIONS-INDUZIERTE
ENTZUENDUNG 1
1.2 DIE T UBERKULOSE 2
1.2.1 MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS - ERREGER DER TUBERKULOSE 2
1.2.2 DIE PATHOGENESE DER TUBERKULOSE 3
1.3 DIE CHAGAS
KRANKHEIT 5
1.3.1 TRYPANOSOMS CRUZI - ERREGER
DER CHAGAS KRANKHEIT 5
1.3.2 DER ENTWICKLUNGSZYKLUS VON T. CRUZI 6
1.3.3 DIE PATHOGENESE
DER CHAGAS KRANKHEIT 6
1.4 DIE IMMUNANTWORT GEGEN DIE
INTRAZELLULAEREN ERREGER M. TUBERCULOSIS
UND T. CRUZI. 8
1.4.1 DIE INITIALE REAKTION
DES IMMUNSYSTEMS AUF EINE
INFEKTION 8
1.4.2 DIE BEDEUTUNG VON
TH1, TH17, TH2 UND
REGULATORISCHEN T ZELLEN
FUER DIE IMMUNABWEHR
INTRAZELLULAERER ERREGER 10
1.4.2.1 DIE IMMUNANTWORT VON
TH1 UND TH17
ZELLEN 10
1.4.2.1.1 DER EINFLUSS VON TH1
UND TH17 ZELLEN AUF
DIE SCHUETZENDE
MAKROPHAGEN-EFFEKTORANTWORT GEGEN INTRAZELLULAERE
ERREGER 12
1.4.2.1.2 DER EINFLUSS VON
TH1 UND TH17
ZELLEN AUF DIE
IMMUNPATHOLOGIE 13
1.4.2.2 DIE IMMUNANTWORT VON TH2 UND
REGULATORISCHEN T ZELLEN 14
1.4.2.2.1 DER EINFLUSS VON TH2
ZELLEN AUF DIE
MAKROPHAGEN-
EFFEKTORANTWORT GEGEN INTRAZELLULAERE
ERREGER 16
1.4.2.2.2 DER EINFLUSS VON TH2
ZELLEN AUF DIE
IMMUNPATHOLOGIE 17
1.5 DIE MODULATION DER
ZELLVERMITTELTEN IMMUNANTWORT DURCH ZYTOKINE
DER
LNTERLEUKIN-12 FAMILIE 17
1.5.1 DIE PRO-INFLAMMATORISCHEN ZYTOKINE
IL-12 UND IL-23 19
1.5.2 DIE ANTI-INFLAMMATORISCHEN ZYTOKINE IL-27
UND IL-35 20
1.5.3 EBI3 ALS GEMEINSAME UNTEREINHEIT
DER ANTI-INFLAMMATORISCHEN
ZYTOKINE IL-27 UND
IL-35 22
1.6 FRAGESTELLUNG DER ARBEIT 25
2 MATERIAL UND METHODEN 26
2.1 MATERIAL 26
I
HTTP://D-NB.INFO/1049669029
INHALTSVERZEICHNIS
2.1.1 VERBRAUCHSMATERIAL 26
2.1.2 NAEHRMEDIEN 26
2.1.2.1 NAEHRBODEN ZUR BAKTERIENKULTUR 26
2.1.2.2 ZELLKULTUR UND
KULTUR PRIMAERER ZELLEN 26
2.1.3 LOESUNGEN 26
2.1.4 REKOMBINANTE PROTEINE 28
2.1.5 BAKTERIEN 28
2.1.6 PARASITEN 28
2.1.7 MAUS- UND
RATTENSTAEMME 28
2.2 METHODEN 29
2.2.1 TIEREXPERIMENTELLE ARBEITEN 29
2.2.1.1 AEROSOL INFEKTION 29
2.2.1.2 INTRAPERITONEALE INFEKTION 30
2.2.1.3 BESTIMMUNG DER UEBERLEBENSRATE 30
2.2.1.4 HERSTELLUNG VON PARASITENSTABILATEN 30
2.2.1.5 BESTIMMUNG DER PARASITAEMIE 31
2.2.1.6 NEUTRALISIERUNG DER TH2 IMMUNANTWORT IN VIVO 31
2.2.2 ENTNAHME VON ORGANEN
UND GEWEBEN 31
2.2.2.1 ORGANENTNAHME AUS M. TUBERCULOSIS-MIZIERTEN MAEUSEN 31
2.2.2.2 ORGANENTNAHME AUS T. CRUZ/ -INFIZIERTEN
MAEUSEN 32
2.2.3 HERSTELLUNG VON
EINZELZELLSUSPENSIONEN 32
2.2.3.1 ZELLZAHLBESTIMMUNG 32
2.2.3.2 ZELLSUSPENSIONEN AUS PERFUNDIERTEN
LUNGEN 33
2.2.3.3 ZELLSUSPENSIONEN AUS MILZ
UND LEBER 33
2.2.3.4 AUFREINIGUNG VON T LYMPHOZYTEN MITTELS
MAGNETISCHER
MARKIERUNG 33
2.2.3.4.1 AUFREINIGUNG VON CD4* T LYMPHOZYTEN 33
2.2.3.4.2 AUFREINIGUNG VON CD8*
T LYMPHOZYTEN 34
2.2.3.5 GEWINNUNG VON PERITONEALMAKROPHAGEN 35
2.2.4 MIKROBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 35
2.2.5 MOLEKULARBIOLOGISCHE ANALYSEN 35
2.2.5.1 GENOTYPISIERUNG DER VERSUCHSTIERE 35
2.2.5.2 RNA-ISOLATION AUS GEWEBE 36
2.2.5.3 REVERSE TRANSKRIPTION 37
2.2.5.4 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR MITTELS
LIGHTCYDER 37
2.2.5.4.1 SYBR GREEN 1 37
2.2.5.4.2 UPL SONDENSYSTEM 38
2.2.6 IMMUNOLOGISCHE ANALYSEN 40
2.2.6.1 PHAENOTYPISIERUNG VON ZELLPOPULATIONEN
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE 40
2.2.6.2 INTRAZELLULAERE MARKIERUNG VON
IFNY UND IL-17A 41
2.2.6.3 ANALYSE ANTIGEN-SPEZIFISCHER IFNY,
IL-4 UND IL-17A-
PRODUZIERENDER T LYMPHOZYTEN MITTELS
ELISPOT 42
2.2.6.3.1 ENTWICKLUNG DES IFNY
UND IL-4 ELISPOTS 43
2.2.6.3.2 ENTWICKLUNG DES IL-17A
ELISPOTS 43
II
INHALTSVERZEICHNIS
2.2.6.4 ANALYSE VON ZYTOKINQUANTIFIZIERUNGEN MITTELS
BD* CYTOMETRIC
BEAID ARRAY 44
2.2.6.5 BESTIMMUNG DER NITRATKONZENTRATION 44
2.2.6.6 STIMULIERUNG DER EINZELZELLSUSPENSION
AUS DER LUNGE 45
2.2.6.7 STIMULIERUNG DER EINZELZELLSUSPENSION
AUS DER MILZ 45
2.2.7 HISTOPATHOLOGISCHE UND IMMUNHISTOCHEMISCHE ANALYSEN 45
2.2.7.1 ORGANAUFBEREITUNG NACH DER
FORMALIN-FIXIENING 45
2.2.7.2 ANFERTIGEN VON PARAFFINSCHNITTEN 46
2.2.7.3 HAEMATOXYLIN UND
EOSIN FAERBUNG 46
2.2.7.4 ZIEHL-NEELSEN FAERBUNG 47
2.2.7.5 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG VON
NOS2 47
2.2.7.6 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNG VON ARG-1 48
2.2.8 STATISTIK 48
3 ERGEBNISSE 50
3.1 DIE BEDEUTUNG VON EBI3
WAEHREND DER INFEKTION
MIT M. TUBERCULOSIS 50
3.1.1 DIE GENEXPRESSION VON
EBI3,1112A UND 1127 IN M.
TUBERCULOSIS-
INFIZIERTEN C57BL/6
MAEUSEN 50
3.1.2 DIE EFFEKTE VON
EBI3 AUF DEN VERLAUF
DER FRUEHEN PHASE
DER
EXPERIMENTELLEN TUBERKULOSE 51
3.1.2.1 DER EINFLUSS VON
EBI3 AUF DEN VERLAUF
DER INFEKTION WAEHREND
DER FRUEHEN PHASE DER
EXPERIMENTELLEN TUBERKULOSE 51
3.1.2.1.1 DIE EBI3
DEFIZIENZ VERMINDERT DAS MYKOBAKTERIELLE
WACHSTUM 51
3.1.2.1.2 EBI3 VERSTAERKT DIE
INFEKTIONS-VERMITTELTE PATHOLOGIE
UND
DIE KEIMZAHLEN
IN DEN LUNGEN WAEHREND EINER INFEKTION
MIT M. TUBERCULOSIS 52
3.1.2.2 DER EINFLUSS DER
EBI3 DEFIZIENZ AUF DIE
PRO-INFLAMMATORISCHE
IMMUNANTWORT NACH
EINER INFEKTION MIT M. TUBERCULOSIS 55
3.1.2.2.1 DIE UNVERAENDERTE EXPRESSION
DER PRO-INFLAMMATORISCHEN
ZYTOKINANTWORT IN M. FUBERCU/OS/S-INFIZIERTEN
EBIJ
1
MAEUSEN 55
3.1.2.2.2 DIE GESTEIGERTE PRODUKTION
ENTZUENDLICHER ZYTOKINE IM
SERUM IN M. FUBERCU/OS/S-INFIZIERTEN EBIJ
1
MAEUSEN
WAEHREND DER FRUEHEN
PHASE 56
3.1.2.2.3 DIE ZELLULAERE ZUSAMMENSETZUNG M. TUBERCULOSIS-
INFIZIERTER LUNGEN IN EBI3*~ MAEUSEN 57
3.1.2.3 DIE MODULATION EINER
TH2 IMMUNANTWORT DURCH
EBI3 IM
VERLAUF DER FRUEHEN
PHASE DER EXPERIMENTELLEN
TUBERKULOSE 62
3.1.2.3.1 DIE VERSTAERKTE EXPRESSION VON
TH2 ZYTOKINEN IN
M. FUBERCU/OS/S-INFIZIERTEN EBIS
1
MAEUSEN 62
3.1.2.3.2 DIE GESTEIGERTE FREQUENZ IL-4-PRODUZIERENDER T ZELLEN IN
EBIJ
1
MAEUSEN NACH EINER
INFEKTION MIT M. TUBERCULOSIS 63
3.1.2.3.3 DIE ERHOEHTE ALTERNATIVE MAKROPHAGENAKTIVIERUNG
IN
M. TUBERCULOSIS-INFIZIERTEN EBIS
1
MAEUSEN 63
3.1.2.4 DIE MODULATION DER
TH1 UND
TH17 IMMUNANTWORT DURCH
EBI3
IM VERLAUF
EINER M. TUBERCULOSIS INFEKTION 64
III
INHALTSVERZEICHNIS
3.1.2.4.1 DIE MODULIERTE EXPRESSION
VON IFNG,
1117A UND 1122 IN
M. TUBERCULOSIS-INFIZIERTEN EBIJ
1
MAEUSEN 64
3.1.2.4.2 DIE IFNY- UND
IL-17A-PRODUKTION DURCH Y8 T UND
NKT ZELLEN WAEHREND
DER INFEKTION MIT M. TUBERCULOSIS 66
3.1.2.4.3 DIE EBI3 DEFIZIENZ FUEHRT
NACH EINER INFEKTION
MIT
M. TUBERCULOSIS ZU EINER
ERHOEHTEN FREQUENZ VON
IFNY- UND IL-17A-PRODUZIERENDEN T ZELLEN 68
3.1.2.4.4 DIE PRODUKTION VON
IFNY UND IL-17A
DURCH CD4 ODER
CD8
LUNGENZELLEN IN M. TUBERCULOSIS-INFIZIERTEN
MAEUSEN 74
3.1.2.5 DIE MODULATION
DER TH1-VERMITTELTEN EFFEKTORMECHANISMEN
VON MAKROPHAGEN
DURCH EBI3
IM VERLAUF
EINER
M. TUBERCULOSIS INFEKTION 75
3.1.3 DER EINFLUSS VON EBI3
AUF DEN VERLAUF
DER SPAETEN PHASE
DER
EXPERIMENTELLEN TUBERKULOSE 78
3.1.3.1 DIE EBI3 DEFIZIENZ FUEHRT ZU EINER ERHOEHTEN RESISTENZ
WAEHREND DER SPAETEN
PHASE EINER M. TUBERCULOSIS
INFEKTION 78
3.1.3.2 DIE EXPRESSION DER
PRO- UND ANTI-INFLAMMATORISCHEN
ZYTOKINANTWORT IN M. FUBERCU/OS/S-INFIZIERTEN EBI3
A
MAEUSEN
WAEHREND DER SPAETEN PHASE
81
3.1.3.3 DIE UNVERAENDERTE PRODUKTION
ENTZUENDLICHER ZYTOKINE IM
SERUM IN M. TUBERCULOSIS-INFIZIERTEN EBIS
1
MAEUSEN WAEHREND
DER SPAETEN PHASE 83
3.1.3.4 DIE FREQUENZ IFNY-
UND IL-17A-PRODUZIERENDER CD4 T ZELLEN
WAEHREND DER SPAETEN PHASE
DER M. TUBERCULOSIS INFEKTION 83
3.1.3.5 DIE MODULATION
DER MAKROPHAGEN-EFFEKTORMECHANISMEN
DURCH DIE
EBI3 DEFIZIENZ IM VERLAUF DER SPAETEN
M. TUBERCULOSIS INFEKTION 85
3.2 DIE BEDEUTUNG VON
EBI3 WAEHREND DER
INFEKTION MIT T. CRUZI 87
3.2.1 DIE GENEXPRESSION VON
EBI3,1112A UND 1127 IN T.
CRUZ/ -INFIZIERTEN
C57BL/6 MAEUSEN 87
3.2.2 DER EINFLUSS VON EBI3
AUF DEN VERLAUF
DER EXPERIMENTELLEN
CHAGAS KRANKHEIT 88
3.2.2.1 DIE EBI3
DEFIZIENZ FUHRT ZU EINER ERHOEHTEN
PARASITAEMIE IM
VERLAUF EINER T. CRUZI
INFEKTION 88
3.2.2.2 DIE HISTOPATHOLOGISCHEN VERAENDERUNGEN
IM VERLAUF DER
EXPERIMENTELLEN CHAGAS KRANKHEIT 89
3.2.2.3 DIE UEBERLEBENSRATE VON EBIJ
1
MAEUSEN
IST WAEHREND DER
INFEKTION MIT T. CRUZI ERNIEDRIGT 91
3.2.2.4 EBIJ
1
MAEUSE SIND GEGENUEBER EINER REINFEKTION
MIT T. CRUZI
RESISTENT 92
3.2.3 DER EINFLUSS DER
EBI3 DEFIZIENZ AUF DIE
INFLAMMATORISCHE
IMMUNANTWORT NACH EINER
INFEKTION MIT T. CRUZI 94
3.2.3.1 DIE EXPRESSION VON INFLAMMATORISCHEN
ZYTOKINEN IN MILZ UND
SERUM WAEHREND DER T. CRUZI INFEKTION 94
3.2.3.2 DIE ZELLULAERE ZUSAMMENSETZUNG T. CA/Z/ -INFIZIERTER
ORGANE IST
IN FIB/3
+
MAEUSEN MODULIERT 96
3.2.4 DIE MODULATION
DER TH1 UND TH17 IMMUNANTWORT
DURCH EBI3
IM
VERLAUF EINER T. CRUZI
INFEKTION 103
IV
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.4.1 DIE MODULIERTE EXPRESSION
VON IFNG,
1117A UND 1122 IN
T. CRUZF-INFIZIERTEN EBIS
1
MAEUSEN 103
3.2.4.2
DIE
IFNY-
UND
IL-17A
-PRODUKTION
DURCH
YS T
UND
NKT
ZELLEN
WAEHREND DER INFEKTION
MIT T. CRUZI
104
3.2.4.3 DIE EBI3 DEFIZIENZ FUEHRT NACH DER
INFEKTION MIT T. CRUZI
ZU
EINER ERHOEHTEN FREQUENZ VON
IFNY- UND
IL-17A-PRODUZIERENDEN T ZELLEN 106
3.2.5 DIE MODULATION
DER TH1
-VERMITTELTEN EFFEKTORMECHANISMEN VON
MAKROPHAGEN DURCH
EBI3 IM VERLAUF EINER T. CRUZI
INFEKTION 109
3.2.6 DIE MODULATION EINER
TH2 IMMUNANTWORT DURCH
EBI3 IM VERLAUF
DER EXPERIMENTELLEN CHAGAS KRANKHEIT 113
3.2.6.1 DIE ERHOEHTE IL-4-PRODUKTION
IN T. CRUZ/ -INFIZIERTEN
EBISMAEUSEN 113
3.2.6.2 DIE VERSTAERKTE EXPRESSION VON
TH2 ZYTOKINEN
UND DIE
ERHOEHTE
ALTERNATIVE MAKROPHAGENAKTIVIERUNG IN T. CRUZ/-INFIZIERTEN
EBI3^ MAEUSEN 114
3.2.6.3 DIE INHIBITION DER
TH2-VERMITTELTEN IMMUNANTWORT FUEHRT ZU
EINER VERMINDERTEN SUSZEPTIBILITAET IN T. CRUZR-INFIZIERTEN
EBI3* MAEUSEN 117
4 DISKUSSION 119
4.1 DIE BEDEUTUNG VON
IL-27/IL-35 FUER DIE TH1, TH17
UND
TH2 IMMUNANTWORT WAEHREND DER
INFEKTION MIT M. TUBERCULOSIS
UND
T. CRUZI. 120
4.2 DIE BEDEUTUNG DER
IL-27/IL-35-ABHAENGIGEN MODULATION
DER
TH IMMUNANTWORTEN FUER
DIE MAKROPHAGENAKTIVIERUNG WAEHREND DER
INFEKTION MIT M. TUBERCULOSIS
UND T. CRUZI 121
4.2.1 DER EINFLUSS VON
IL-27/IL-35 AUF DIE
KONTROLLE VON M. TUBERCULOSIS.
122
4.2.2 DER EINFLUSS VON
IL-27/IL-35 AUF DIE
KONTROLLE VON T. CRUZI 124
4.2.2.1 DIE ROLLE VON
IL-27/IL-35 AUF DIE ALTERNATIVE
MAKROPHAGENAKTIVIERUNG UND ARG-1
AKTIVITAET WAEHREND
DER INFEKTION MIT T. CRUZI 124
4.2.2.2 DIE KOMPETITIVE AUSEINANDERSETZUNG VON ARG-1
UND NOS2 125
4.2.2.3 DIE ARG-1-ABHAENGIGE SYNTHESE VON
POLYAMINEN WAEHREND DER
INFEKTION MIT T. CRUZI 126
4.2.2.4 DIE KONTROLLE DER
TH2-VERMITTELTEN SUPPRESSION VON
MAKROPHAGEN-EFFEKTORFUNKTIONEN GEGEN T. CRUZI DURCH
IL-27/IL-35 127
4.3 DER EINFLUSS VON IL-27/IL-35
AUF IMMUNPATHOLOGISCHE KONSEQUENZEN
WAEHREND DER INFEKTION
MIT INTRAZELLULAEREN ERREGEM 128
4.3.1 DER EINFLUSS VON IL-27/IL-35
AUF DIE LUNGENPATHOLOGIE
WAEHREND
EINER INFEKTION
MIT M. TUBERCULOSIS 128
4.3.2 DER EINFLUSS VON IL-27/IL-35
AUF DIE LEBERPATHOLOGIE
WAEHREND
EINER INFEKTION MIT
T. CRUZI 129
4.4 DIE DIFFERENTIELLE BEDEUTUNG VON
IL-27 UND IL-35
WAEHREND DER
EXPERIMENTELLEN TUBERKULOSE UND
CHAGAS KRANKHEIT 130
4.5 DIE UNTERSCHIEDLICHE WIRKUNG VON
IL-27 UND IL-35
AUF DEN VERLAUF
DER INFEKTION MIT M. TUBERCULOSIS
UND T. CRUZI 132
V
INHALTSVERZEICHNIS
4.6 IL-27/IL-35 ALS ZENTRALE
REGULATOREN DER ENTZUENDLICHEN
IMMUNANTWORT UND MOEGLICHE THERAPEUTISCHE
ANSAETZE WAEHREND DER
TUBERKULOSE UND CHAGAS KRANKHEIT 135
5 ZUSAMMENFASSUNG 138
ANHANG 139
LITERATURVERZEICHNIS 141
DANKSAGUNG 165
LEBENSLAUF 166
PUBLIKATION 167
EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 168
VI
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