Regulation des humanen c-fos Promotors durch Insulin und PDGF:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1999
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INHALTSVERZEICHES
ABKUERZUNGEN
1.
ZUSAMMENFASSUNG
2.
EINLEITUNG
2.1.
REZEPTOR-TYROSIN-KINASEN
(RTKS)
2.2.
INSULIN
SIGNALTRANSDUKTION
23.
REGULATION
DES
C-FOS
PROMOTORS
2.4.
INSULIN
RESPONSIVE
ELEMENTE
BZW.
SEQUENZEN
2.5.
INSULINRESISTENZ
2.6.
AUFGABENSTELLUNG
3.
ERGEBNISSE
I)
IDENTIFIZIERUNG
DES
INSULINSENSITIVES
CIS-ELEMENTS
AUF
DEM
C-FOS
PROMOTOR
3.1.
ERSTELLUNG
5
'
-DELETIERTE
PROMOTORKONSTRUKTE
DES
C-FOS-GENS
3.1.1.
PROMOTORREPORTERGEN-ANALYSEN
MIT
DEN
5
'
-DELETIERTEN
PROMOTORKONSTRUKTEN
DES
C
FOS-GENS
IN
LEBER
UND
GLATTEN
GEFAESSMUSKELZELLEN
3.2.
ERSTELLUNG
MUTIERTE
PROMOTORKONSTRUKTE
DES
C-FOS-GENS
3.2.1.
PROMOTORREPORTERGEN-ANALYSEN
MIT
DEN
MUTIERTEN
PROMOTORKONSTRUKTEN
DES
C-FOS
GENS
IN
LEBER
UND
GLATTEN
GEFAESSMUSKELZELLEN
33.
EINFLUSS
SPEZIFISCHER
KINASE
INHIBITOREN
AUF
DIE
STIMULIERBARKEIT
DES
C-FOS
PROMOTORS
DURCH
INSULIN
UND
PDGF
II)
IDENTIFIZIERUNG
DES
SIGNALDEFEKTS
BEI
EINER
PATIENTIN
(PH)
MIT
KONGENITALER
LIPOATROPHIE
UND
INSULINRESISTENZ
3.4.
PROMOTORREPORTERGEN-ANALYSEN
3.5.
SEQUENZANALYSE
DES
C-FOS-PROMOTORS
3.6.
REKONSTRUKTION
DER
INDUZIERBARKEIT
MIT
INSULIN
DES
C-FOS-PROMOTORS
IN
PH-ZELLEN
3.7.
EINFLUSS
DER
IDENTIFIZIERTEN
PUNKTMUTATION
AUF
DIE
PROMOTORAKTIVITAET
IN
KLONALEN
FIBROBLASTEN
(3T3),
GLATTEN
GEFAESSMUSKELZELLEN
(A7R5)
UND
HEPATOMAZELLEN
(HEPG2)
3.8.
GELRETARDIERUNGS-EXPERIMENTE
3.9.
FOOTPRINTING-.
LOKALISATION
EINES
NEUEN
CIS-ELEMENTS
AUF
DEM
C-FOS
PROMOTOR
3.10.
CHARAKTERISIERUNG
DER
DNA-BINDENDEN
PROTEINE
AN
DIE
PUNKTMUTATION
VON
PH
DURCH
UV-CROSSLINKING
4.
DISKUSSION
5.
MATERIAL
&
METHODEN
4.1.
4.2.
4.3.
IDENTIFIZIERUNG
DES
INSULIN-SENSITIVEN
CIS-ELEMENTS
IM
PROMOTOR
DES
CFOS-GENS
UNTERSUCHUNGEN
MIT
DEN
5'-DELETIERTEN
CFOS-PROMOTORKONSTRUKTEN
UNTERSUCHUNGEN
MIT
DEN
MUTIERTEN
CFOS-PROMOTORKONSTRUKTEN
4.4.
IDENTIFIZIERUNG
DES
INSULIN-VERMITTELNDEN
SIGNALWEGS
IN
LEBER
UND
GLATTEN
GEFAESSMUSKELZELLEN
4.5.
CHARAKTERISIERUNG
EINES
GENREGULATORISCHEN
POSTREZEPTORDEFEKTES
IM
C-FOS
PROMOTOR
BEI
EINER
PATIENTIN
(PH)
MIT
GENETISCH
BEDINGTER
INSULINRESISTENZ
4.6.
4.7.
4.8.
4.9.
TRANSFEKTION
MIT
DEM
GAL4-ELK-1
FUSIONSPROTEINSYSTEM
SEQUENZANALYSE
DES
CFOS-PROMOTORS
REKONSTITUTION
DER
CFOS
PROMOTORAKTIVITAET
IN
FIBROBLASTEN
DER
PATIENTIN
PH
EINFLUSS
DER
PUNKTMUTATION
AUF
DIE
CFOS-PROMOTORAKTIVITAET
IN
VERSCHIEDENEN
EUKARYONTISCHEN
ZELLEN
4.10.
4.11.
4.12.
4.13.
4.14.
UNTERSUCHUNG
DES
NEUEN
CIS-ELEMENTS
AUF
DEM
CFOS-PROMOTOR
GELRETARDIERUNGS-EXPERIMENTE
CHARAKTERISIERUNG
DER
BINDUNGSSTELLE
DES
NEUEN
CIS-ELEMENTS
AUF
DEM
CFOS-PROMOTOR
FOOTPRINTING:
LOKALISATION
EINES
NEUEN
CIS-ELEMENTS
AUF
DEM
CFOS-PROMOTOR
CHARAKTERISIERUNG
DER
DNA-BINDENDEN
PROTEINE
AN
DIE
PUNKTMUTATION
VON
PH
DURCH
UV-CROSSLINKING
4.15.
4.16.
IMPLIKATIONEN
DER
MUTATION
AUSBLICK
5.1.
NICHTBIOLOGISCHES
MATERIAL
5.1.1.
GERAETE
5.1.2.
ISOTOPE
5.1.3.
ENZYME
5.1.4.
VEKTOREN
5.1.5.
CHEMIKALIEN
5.1.6.
SEPHADEX
SAEULEN
5.1.7.
DOKUMENTATION
5.1.8.
NAEHRMEDIEN
UND
PLATTEN
5.2.
BIOLOGISCHE
MATERIALIEN
5.2.1.
EUKARYOTISCHE
ZELLEN
5.2.2.
BAKTERIENSTAEMME
5.3.
METHODEN
5.3.1.
OLIGONUKLEOTID
SYNTHESE
5.3.2.
HERSTELLUNG
GENOMISCHER
DNA
5.3.3.
PCR
5.3.3.1.
VORBEREITUNG
DER
PCR-PRODUKTE
FUER
LIGATION
5.3.4.
LIGATION
UND
TRANSFORMATION
5.3.4.1.
LIGATION
5.3.4.2.
KOMPETENTE
ZELLEN
5.3.4.3.
TRANSFORMATION
5.3.5.
PLASMIDPRAEPARATIONEN
5.3.5.1.
PLASMID-MINI-PRAEPARATION
(ALKALI-METHODE)
5.3.5.2.
PLASMID-GROSS-PRAEPARATION
(QIAGEN
PLASMID
ENDOFREE
KIT)
5.3.6.
DNA-SEQUENZIERUNG
5.3.6.1.
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
5.3.7.
HERSTELLUNG
VON
C-FOS
PROMOTORKONSTRUKTEN
5.3.7.I.
C-FOS
PROMOTOR
MUTATIONSKONSTRUKTE
5.4.
TRANSFEKTION
VON
EUKARYONTISCHEN
ZELLEN
5.4.1.
ZELLKULTUR
5.4.2.
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
5.4.2.I.
LIPOFEKTION
5.4.2.2.
ELEKTROPORATION
5.4.2.2.I.
KLONALE
ZELLEN
5.4.2.2.2.
PRIMAERE
FIBROBALSTEN
5.4.2.3.
AUFARBEITUNG
DER
TRANSFIZIERTEN
ZELLEN
5.4.2.3.I.
SS-GAL-ASSAY
5.4.2.3.2.
LUZIFERASE-ASSAY
5.5.
METHODEN
ZU
UNTERSUCHUNG
VON
PROTEIN-DNA-WECHSELWIRKUNG
5.5.1.
PROTEINBESTIMMUNG
5.5.2.
KEMPROTEIN
EXTRAKTION
5.5.3.
GELRETARDIERUNGS-EXPERIMENTE
5.5.3.1.
ERSTELLUNG
VON
DOPPELSTRAENGIGEN
DNA-FRAGMENTEN
5.5.3.2.
REINIGUNG
UND
MARKIERUNG
DER
FRAGMENTE
5.5.3.3.
ANALYSE
VON
PROTEIN-DNA-WECHSELWIRKUNG
5.5.3.4.
GELELEKTROPHORESE
5.5.4.
DNA-PROTEIN-UV-CROSS/INFA'NG
5.5.4.1.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
5.5.4.2.
SILBERFAERBUNG
MIT
BIORAD
ASSAY
SYSTEMS
5.5.5.
DNASE
1
FOOTPRINTING
EXPERIEMENT
5.5.5.1.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DURCH
KLENOW
REPAIR
5.5.5.2.
PROTEINREAKTION-DNA-BINDUNGSREAKTION
S.5.5.3.
DNASE
I
REAKTION
5.5.5.4.
FRAGMENT
SEQUENZREAKTION
MODIFIZIERT
NACH
MAXAM
A.M.
UND
GILBERT
W.
5.S.5.5.
GELLAUF
BEDINGUNGEN
6.
LITERATUR |
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