Einfluß von Rhenium 186 und Rhenium 188 auf humane Endothelzellen als mögliche Restenoseprophylaxe in einem Zellkulturmodell:
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2007
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adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS VI
TABELLENVERZEICHNIS VII
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS VIII
1 EINLEITUNG 1
1.1 Problematik der Arteriosklerose 1
1.2 Pathogenese der Arteriosklerose 2
1.3 Interventionelle Therapiemöglichkeiten 3
1.4 Die In-Stent-Restenose 4
1.4.1 Thrombosen 4
1.4.2 Entzündungsreaktionen 4
1.4.3 Proliferation der Neointima 5
1.5 Bedeutung der Endothelzellen ( EC ) 5
1.6 Maßnahmen zur Reduktion der Restenoserate 6
1.7 Radioaktive Strahlung und Restenose 7
1.8 Die Pathophysiologie ionisierender Strahlung 8
1.9 Einheiten und Begriffe der Strahlendosis 9
1.10 Der Zellzyklus und ionisierende Strahlung 10
1.11 Faktoren zur Beeinflussung der Strahlenwirkung 11
1.12 Die 4 R s der Strahlenbiologie 12
1.13 Nuklidauswahl 12
1.13.1 Beta-oder Gamma-Strahler 13
1.13.2 Vor- und Nachteile einzelner radioaktiver Substanzen 14
1.14 Bestimmung der Dosis 16
1.15 Fragestellung und Versuchsstrategie 16
I
2 MATERIAL UND METHODEN 18
2.1 Die Endothelzellen 18
2.2 Medien und Medienzusätze 18
2.2.1 Mediumgrundsubstanzen 18
2.2.2 Fetales Kälber-Serum (FCS) 18
2.2.3 Penicillin/Streptomycin (Pen/Strep) 19
2.2.4 L-Glutamin 19
2.2.5 ECGS-Trockensubstanz 19
2.2.6 Heparin-Stammlösung 19
2.2.7 Trypsin-Lösung 20
2.2.8 Phosphate Buffered Saline (PBS) 20
2.2.9 Kulturmedium 20
2.2.10 Kryomedium 20
2.3 Methoden der Zellkultur 21
2.3.1 Erhaltungskultur 21
2.3.2 Subkultivierung 21
2.3.3 Kryokonservierung 21
2.3.4 Bestimmung der Anwachsrate 22
2.3.5 DAPI-(4,6-Diamidino-2-phenylindol)-Test 22
2.4 Radiatio 23
2.4.1 Rhenium 186 und Rhenium 188 23
2.4.2 Der Nuklidgenerator 23
2.4.3 Dosisberechnung 24
2.5 Proliferationskinetik 25
2.6 Koloniebildungs-Assay 26
2.7 Prinzip derflußzytometrischen Messung 27
2.7.1 BrdU-Lösung 27
2.7.2 PBS/BSA-Lösung 27
2.7.3 Pepsinlösung 27
2.7.4 Salzsäure (HCI) 28
2.7.5 Antikörper (AK) 28
II
2.7.6 Propidiumiodid-Lösung (Pl) 28
2.7.7 RNAse 28
2.7.8 Propidiumiodid-RNAse 29
2.8 Verfahren der Zellzyklusanalyse 29
2.8.1 Isolation derZellen 29
2.8.2 Aufarbeitung für die Durchflusszytometrie 30
2.8.3 Auswertung der Durchflusszytometrie 32
2.9 Immunfluoreszenz 33
2.9.1 Zellvorbereitung 33
2.9.2 Darstellung von Vimentin 34
2.9.3 Doppelfärbung mit DAPI 35
2.9.4 Darstellung des von-Willebrand-Faktor (vWF) 35
2.10 Übrige Materialien und Geräte 36
2.11 Statistik und mathematische Auswertung 37
2.11.1 Proliferationskinetik 37
2.11.2 Kumulative Populationsverdopplungszahl 38
2.11.3 Tag-zu-Tag-Wachstumsrate 38
2.11.4 Proliferationshemmungsrate 39
2.11.5 Koloniebildungsassay 39
2.11.6 Zellzyklusanalyse 40
3 ERGEBNISSE 41
3.1 Proliferationskinetik 41
3.2 Kumulative Populationsverdopplungszahl 45
3.3 Tag-zu-Tag-Wachstumsrate 46
3.4 Proliferationshemmungsrate 47
3.5 Koloniebildung (KOBI) 48
3.5.1 Rhenium-186 51
3.5.2 Rhenium-188 51
3.5.3 Reduktion der Klonogenen Aktivität durch Kontaktinhibition ... 52
3.5.4 Schätzung der Erhaltungsdosis EDso 54
III
3.6 Zellzyklusanalyse 55
3.6.1 Rhenium-186 57
3.6.2 Rhenium-188 60
3.6.3 Bedeutung des natürlichen Phasenverlaufs 63
3.6.4 Die S-Phase 63
3.6.5 Die G1-Phase 64
3.6.6 Die G2/M-Phase 64
3.7 Immunfluoreszenz 65
3.7.1 Darstellung der Intermediärfilamente durch Vimentin 65
3.7.2 Zellkernfärbung mit DAPI 65
3.7.3 Anfärbung des von-Willebrand-Faktors 69
4 DISKUSSION 70
4.1 Wirkungen der radioaktiven Strahlung auf die Restenose 70
4.1.1 Zellnekrose und Apoptose 70
4.1.2 Wirkung der Strahlung auf den Zellzyklus 71
4.1.3 Extrazelluläre Matrix und Zellinteraktionen 71
4.1.4 Bestimmung der Dosis 73
4.2 Zellkulturversuche 74
4.3 Die intravaskuläre Brachytherapie im Tiermodell 76
4.4 Klinische Studien 78
4.5 Zytoskelettdarstellungen mittels Immunfluoreszenz 81
4.6 Eigene Untersuchung 82
4.6.1 Proliferationskinetik 82
4.6.2 Koloniebildung 84
4.6.3 Zellzyklusanalyse 86
4.6.4 Immunfluoreszenz 89
4.7 Bewertung des in-vitro-Modells 92
4.8 Rhenium 186 oder Rhenium 188 ? 93
4.9 Ausblick 94
IV
5 ZUSAMMENFASSUNG 97
6 LITERATURVERZEICHNIS 99
DANKSAGUNG 111
CURRICULUM VITAE 113
V
|
adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS VI
TABELLENVERZEICHNIS VII
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS VIII
1 EINLEITUNG 1
1.1 Problematik der Arteriosklerose 1
1.2 Pathogenese der Arteriosklerose 2
1.3 Interventionelle Therapiemöglichkeiten 3
1.4 Die In-Stent-Restenose 4
1.4.1 Thrombosen 4
1.4.2 Entzündungsreaktionen 4
1.4.3 Proliferation der Neointima 5
1.5 Bedeutung der Endothelzellen ( EC ) 5
1.6 Maßnahmen zur Reduktion der Restenoserate 6
1.7 Radioaktive Strahlung und Restenose 7
1.8 Die Pathophysiologie ionisierender Strahlung 8
1.9 Einheiten und Begriffe der Strahlendosis 9
1.10 Der Zellzyklus und ionisierende Strahlung 10
1.11 Faktoren zur Beeinflussung der Strahlenwirkung 11
1.12 Die 4 R's der Strahlenbiologie 12
1.13 Nuklidauswahl 12
1.13.1 Beta-oder Gamma-Strahler 13
1.13.2 Vor- und Nachteile einzelner radioaktiver Substanzen 14
1.14 Bestimmung der Dosis 16
1.15 Fragestellung und Versuchsstrategie 16
I
2 MATERIAL UND METHODEN 18
2.1 Die Endothelzellen 18
2.2 Medien und Medienzusätze 18
2.2.1 Mediumgrundsubstanzen 18
2.2.2 Fetales Kälber-Serum (FCS) 18
2.2.3 Penicillin/Streptomycin (Pen/Strep) 19
2.2.4 L-Glutamin 19
2.2.5 ECGS-Trockensubstanz 19
2.2.6 Heparin-Stammlösung 19
2.2.7 Trypsin-Lösung 20
2.2.8 Phosphate Buffered Saline (PBS) 20
2.2.9 Kulturmedium 20
2.2.10 Kryomedium 20
2.3 Methoden der Zellkultur 21
2.3.1 Erhaltungskultur 21
2.3.2 Subkultivierung 21
2.3.3 Kryokonservierung 21
2.3.4 Bestimmung der Anwachsrate 22
2.3.5 DAPI-(4,6-Diamidino-2-phenylindol)-Test 22
2.4 Radiatio 23
2.4.1 Rhenium 186 und Rhenium 188 23
2.4.2 Der Nuklidgenerator 23
2.4.3 Dosisberechnung 24
2.5 Proliferationskinetik 25
2.6 Koloniebildungs-Assay 26
2.7 Prinzip derflußzytometrischen Messung 27
2.7.1 BrdU-Lösung 27
2.7.2 PBS/BSA-Lösung 27
2.7.3 Pepsinlösung 27
2.7.4 Salzsäure (HCI) 28
2.7.5 Antikörper (AK) 28
II
2.7.6 Propidiumiodid-Lösung (Pl) 28
2.7.7 RNAse 28
2.7.8 Propidiumiodid-RNAse 29
2.8 Verfahren der Zellzyklusanalyse 29
2.8.1 Isolation derZellen 29
2.8.2 Aufarbeitung für die Durchflusszytometrie 30
2.8.3 Auswertung der Durchflusszytometrie 32
2.9 Immunfluoreszenz 33
2.9.1 Zellvorbereitung 33
2.9.2 Darstellung von Vimentin 34
2.9.3 Doppelfärbung mit DAPI 35
2.9.4 Darstellung des von-Willebrand-Faktor (vWF) 35
2.10 Übrige Materialien und Geräte 36
2.11 Statistik und mathematische Auswertung 37
2.11.1 Proliferationskinetik 37
2.11.2 Kumulative Populationsverdopplungszahl 38
2.11.3 Tag-zu-Tag-Wachstumsrate 38
2.11.4 Proliferationshemmungsrate 39
2.11.5 Koloniebildungsassay 39
2.11.6 Zellzyklusanalyse 40
3 ERGEBNISSE 41
3.1 Proliferationskinetik 41
3.2 Kumulative Populationsverdopplungszahl 45
3.3 Tag-zu-Tag-Wachstumsrate 46
3.4 Proliferationshemmungsrate 47
3.5 Koloniebildung (KOBI) 48
3.5.1 Rhenium-186 51
3.5.2 Rhenium-188 51
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3.5.4 Schätzung der Erhaltungsdosis EDso 54
III
3.6 Zellzyklusanalyse 55
3.6.1 Rhenium-186 57
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4.1.4 Bestimmung der Dosis 73
4.2 Zellkulturversuche 74
4.3 Die intravaskuläre Brachytherapie im Tiermodell 76
4.4 Klinische Studien 78
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4.6.1 Proliferationskinetik 82
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4.6.4 Immunfluoreszenz 89
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4.8 Rhenium 186 oder Rhenium 188 ? 93
4.9 Ausblick 94
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