Funktionelle Analyse der ZmHox-Homeoboxgene aus Zea mays L.:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
L.EINLEITUNG
.
1
1.1.
PFLANZENENTWICKLUNG
.
1
1.2.
DIE
HOMEODOMAENE
'
ENTDECKUNG,
STRUKTUR,
FUNKTION
UND
VORKOMMEN
.
3
1.3.
HOMEOBOXGENE
IN
PFLANZEN
.
5
1.4.
MODELLE
DER
BLUETENENTWICKLUNG
.
9
1.5.
KEMLOKALISATIONSSIGNALE
.
11
1.6.
ZIELE
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
.
11
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
13
2
1.
MATERIAL
.
13
2.1.1.
CHEMIKALIEN,
ENZYME,
FILME
UND
RADIOISOTOPE
.
13
2.1.2.
PUFFER
UND
MEDIEN
.
13
2.1.3.
DESOXY-OLIGONUKLEOTIDE
(PRIMER
UND
LINKER)
.
15
2.1.4.
BAKTERIEN
UND
PHAGEN
.
17
2.1.5.
PLASMIDVEKTOREN
.
17
2.1.6.
PFLANZENMATERIAL
.
18
2.2.
METHODEN
.
18
2.2.1.
ALLGEMEINE
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
18
2.2.2.
ISOLIERUNG VON
MAISEMBRYONEN
VERSCHIEDENER
ENTWICKLUNGSSTADIEN
.
18
2.2.3.
KONSTRUKTION
UND
DURCHSUCHEN
VON
CDNA-BANKEN
.
19
2.2.3.1.
KONSTRUKTION
UND
TEST
VON
CDNA-BANKEN
AUS
MAISEMBRYONEN
.
19
2.2.3.2.
DURCHSUCHEN
VON
CDNA-BANKEN.
PLAQUE-HYBRIDISIERUNG
.
20
2.2.4.
ISOLIERUNG
VON
RNA
UND
IVORTHERN-BLOT-ANALYSEN
.
20
2.2.4.1.
ISOLIERUNG
VON
POLYA
+
-RNA
.
20
2.2.4.2.
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
.
20
2.2.4.3.
NORRTERN-BLOT-ANALYSE
.
20
2.2.5.
ISOLIERUNG VON
DNA
UND
SOUTAERN-BLOT-ANALYSEN
.
21
2.2.5.1.
ISOLIERUNG
VON
PLASMID
MINI-DNA
AUS
E.
COLI
UND
AGROBACTERIUM
TUMEFACIENS
.
21
2.2.5.2.
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-MIDI-DNA
.
21
2.2.5.3.
ISOLIERUNG VON
PHAGEN-DNA
.
22
2.2.5.4.
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
PFLANZEN-DNA
.
22
2.2.5.5.
SOUTHEM-BLOT-ANALYSE
(SOUTHERN,
1975)
.
22
2.2.6.
HERSTELLUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
SONDEN
.
22
2.2.7.
DNA-SEQUENZANALYSE
.
23
2.2.8.
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
.
23
2.2.9.
ISOLIERUNG
VON
NUKLEAEREN
PROTEINEN
UND
JPESTERN-BLOT-ANALYSE
.
24
2.2.9.1.
ISOLIERUNG
VON
NUKLEAEREN
PROTEINEXTRAKTEN
AUS
TABAKBLAETTERN
.
24
2.2.9.2.
IPESTEM-BLOT-ANALYSE
.
24
2.2.10.
IN
VITRO-TRANSKRIPTION
UND
-TRANSLATION
.
24
2.2.11.
TRANSIENTE
EXPRESSIONSTESTS
.
25
2.2.11.1.
ISOLIERUNG
UND
TRANSFEKTION
VON PETUNIENPROTOPLASTEN
.
25
2.2.11.2.
HISTOCHEMISCHER
GUS-AKTIVITAETSTEST
.
25
2.2.11.3.
INDIREKTE
IMMUNOFLUORESZENZ
.
25
2.2.12.
STABILE
TRANSFORMATIONEN
.
25
2.2.12.1.
TRANSFORMATION
VON
AGROBACTERIUM
TUMEFACIENS
.
25
2.2.12.2.
TRANSFORMATION
VON
NICOTIANA
TABACUM
.
26
2.2.12.3.
AUSLEGEN
VON
TABAKSAMEN
.
26
2.2.13.
STATISTISCHE
KALKULATIONEN
.
26
INHALTSVERZEICHNIS
3.
ERGEBNISSE
.
27
3.1.
SUCHE
NACH
LAENGEREN
KLONEN
DER
ZMHOX-GENE
UND
NACH
ZUSAETZLICHEN
MITGLIEDERN
DIESER
GENFAMILIE
.
27
3.1.1.
KONSTRUKTION
VON
CDNA-BANKEN
AUS
MAISEMBRYONEN
VERSCHIEDENER
ENTWICKLUNGSSTADIEN
.
27
3.1.2.
DURCHSUCHEN
VON
CDNA-BANKEN
.
28
3.2.
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DER
ZM/7OX-GENPRODUKTE
.
29
3.2.1.
KONSTRUKTION
VON
VEKTOREN,
DIE
ZUR
EKTOPISCHEN
EXPRESSION
VON
LANGEN
OFFENEN
LESERASTEM
BZW.
EINZELNER
DOMAENENKODIERENDER
BEREICHE
IN
PFLANZEN
EINGESETZT
WERDEN
KOENNEN
.
30
3.2.1.1.
KONSTRUKTION
EINES
VEKTORS,
DER
ZUR
EXPRESSION
EINES
LANGEN
OFFENEN
LESERASTERS
BENUTZT
WERDEN
KANN
.
30
3.2.1.2.
HERSTELLUNG
VON
VEKTOREN,
DIE
ZUR
EXPRESSION
EINZELNER
DOMAENENKODIERENDER
BEREICHE
EINGESETZT
WERDEN
KOENNEN
.
33
3.2.2.
KLONIERUNGEN
ZUR
EKTOPISCHEN
EXPRESSION
DER
ZMHOX-GENE
UNTER
DER
KONTROLLE
DES
CAMV
35S
PROMOTORS
IM
TRANSGENEN
TABAK
.
34
3
2.2.1.
ZUSAMMENSETZEN
DER
ZMHOX-GENE
.
35
3.2.2
2
KLONIERUNG
DER
ZMHOX-GENE
IN
PRT-Q-NOTL
BZW.
PRT-FI-NOTL-ASCI
.
38
3.2
2.3.
KLONIERUNG
DER
ZMHOX-GENE
IN
BINAERE
VEKTOREN.
AGROBAKTERIEN
UND
TABAKTRANSFOR
MATIONEN
.
40
3.2.3.
ANALYSE
DER
ZMHOXLA/LB
EXPRIMIERENDEN
TABAKPFLANZEN
.
42
3.2.3.1.
BESTIMMUNG
DER
INTEGRIERTEN
TRANSGEN-KOPIENZAHLEN:
SBUZ/IERN-ANALYSEN.
42
3.2.3.2.
VERAENDERUNGEN
IM
TABAKPHAENOTYP,
HERVORGERUFEN
DURCH
DIE
EKTOPISCHE
EXPRESSION
VON
ZMHOXLA
ODER
ZMHOXLB
.
44
3
2.3.2.1.
VERAENDERUNGEN
DER
TABAKBLUETE
.
44
3.2.3.2.2.
VERAENDERUNGEN
IM
VEGETATIVEN
PFLANZENKOERPER
.
49
32.3.2.3.
DIE
KORRELATION
ZWISCHEN
DEN
VERSCHIEDENEN
MORPHOLOGISCHEN
VERAENDERUNGEN
.
51
3.2.3.3.
EXPRESSIONSSTUDIEN
AN
ZMHOXLA/LB
EKTOPISCH
EXPRIMIERENDEN
TABAKPFLANZEN
.
52
3
2.3.4.
VERERBUNG
DER
BEOBACHTETEN
PHAENOTYPISCHEN
VERAENDERUNGEN
DER
ZMHOXLA/LB
EXPRIMIE
RENDEN
PFLANZEN
IN
DIE
NAECHSTE
GENERATION
.
54
3.3.
ANALYSE
DER
KEMLOKALISATIONSFUNKTION
DER
N-TERMINALEN
SEQUENZWIEDERHOLUNGEN
VON
ZMHOX2A/2B
.
55
3.3.1.
FUSIONEN,
DER
FUER
DIE
NLS-AEHNLICHEN
SEQUENZWIEDERHOLUNGEN
KODIERENDEN
BEREICHE,
VON
ZMHOX2B
MIT
DEM
GUS-GEN
.
56
3.3.2.
TRANSFEKTION
VON
PETUNIENPROTOPLASTEN
UND
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
DER
CHIMAEREN
GUS-PROTEINE
.
58
4.
DISKUSSION
.
60
4.1.
ZMHOXLA
UND
ZMHOXLB
BESITZEN
WAHRSCHEINLICH
SEHR
AEHNLICHE
FUNKTIONEN
.
60
4.2.
DIE
EKTOPISCHE
EXPRESSION
VON
ZMHOXLA
ODER
ZMHOXLB
RUFT
PLEIOTROPE
EFFEKTE
IN
DER
ENTWICKLUNG
DER
BLUETE
UND
DES
VEGETATIVEN
PFLANZENKOERPERS
HERVOR
.
62
4.2.1.
DIE
EKTOPISCHE
EXPRESSION
VON
ZMHOXLA/LB
VERAENDERT
DIE BLUETENORGANIDENTITAET
.
64
4.2.2.
MOEGLICHE
VERAENDERUNGEN
DES
PHYTOHORMONHAUSHALTES
IM
VEGETATIVEN
PFLANZENKOERPER
.
67
4.3.
DIE
FEHLENDE
KORRELATION
ZWISCHEN
DER
STAERKE
DER
EKTOPISCHEN
ZMHOXL
EXPRESSION
UND
DEN
BEOBACHTETEN
PHAENOTYPISCHEN
VERAENDERUNGEN
.
68
4.4.
DIE KEMLOKALISATIONSFUNKTION
DER
N-TERMINALEN
SEQUENZWIEDERHOLUNGEN
VON
ZMHOX2A/2B
.
70
4.5.
AUSBLICK
.
72
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
74
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
76
ANHANG
.
88 |
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